基于汞介导的适体信标和金纳米复合物检测汞和mts的新原理新方法

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4、染的生物标志物也已被广泛应用。因此，建立一种简便、灵敏、快速、实用的检测汞和金属硫蛋白的新方法对环境监测、健康风险评价，以及生物学功能的研究都具有重要意义。本文第二章基于汞介导的适体分子信标，建立了双通道测定汞和金属硫蛋白的新方法。实验设计了一条只在5′端标有荧光基团（6-FAM）、富含T碱基的寡核苷酸(TRO)，将其置于pH=8.5的2+Tris–HCl缓冲溶液中，当存在汞离子时，通过T–Hg–T结构的形成，6-羧基荧光素（6-FAM）标记的富T寡核苷酸能够折叠形成适体分子2+信标，首次发现，末端形成的T–Hg–T结构能够通过荧光共振能量

5、转移猝灭6-FAM的荧光；金属硫蛋白与汞离子有着很强的结合力，2+实验发现加入MTs之后，体系的荧光恢复，表明MTs能够与Hg结2+2+合，破坏T–Hg–T结构。基于T–Hg–T结构的形成和破坏，建立2+了双通道测定汞离子和金属硫蛋白的新方法。Hg的浓度为−8−7−12+1.42×10～3.0×10mol·L时，体系的∆F与Hg浓度有良好的线性−7−1关系。回归方程为∆F=–18.79+301.2c(×10mol·L)，r=0.9991，检I-9-1−9−7出限为4.28×10mol·L。MTs的浓度在5.63×10～2.75×10−1mo

6、l·L范围内，与体系荧光峰值强度变化呈良好线性关系，线性回−7−1归方程为ΔF=–42.27+365.3c(×10mol·L)，r=0.9987，检出限为−9−11.69×10mol·L。本文设计的适体分子信标只需对核酸探针进行单荧光基团标记，节约了实验成本；富T寡核苷酸链末端形成的2+T–Hg–T结构能够猝灭荧光基团的荧光这一发现，为新型分子信标的构建提供了新思路和实验依据。提出的方法已用于实际样品的检测，进一步证明本方法的可行性。本文第三章建立了基于金纳米粒子-吖啶橙表面能量转移检测金属硫蛋白的新方法。实验发现，加入金纳米粒子之后，荧光

7、染料吖啶橙被金纳米粒子表面吸附，通过表面能量转移导致体系荧光强度减弱。加入MTs之后，MTs能与金纳米作用形成复合物，吖啶橙脱离金纳米表面，荧光恢复。据此建立了一种测定MTs的荧光传感分析法。在最优实验条件下，体系最大荧光峰位于524nm。MTs浓度在−9−7−19.3×10～1.5×10mol·L范围内，与体系荧光强度变化值呈良好线−7−1性关系，线性回归方程为ΔF=3.798+337.3c(×10mol·L)，r=−9−10.9965，检出限为2.79×10mol·L。该方法灵敏度高，便于操作。可以应用于实际样品中MTs的测定。关键词：

8、金属硫蛋白；富T寡核苷酸；汞；汞介导的适体信标；金纳米粒子；表面能量转移IIANOVELPRINCIPLEANDMETHODTODETECTMERCURYANDMTSBASEDO