富血小板血浆对痤疮丙酸杆菌的抑菌作用及疗效研究

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1、＋４３分巧号Ｒ扣１．１学校代巧１０５７２ＵＤＣ６１０巧級公开学号２０１２１２２６巧７（ｊ）户州中虔禱夫＃ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕±学位论文富血小板血浆对痊疮丙酸杆茜的抑菌作用及疗效研巧学位申请人叶巧露指导教师姓名单桂秋专业名称化床栓验诊巧学申请学位类型专业学位论文提交日期２０１５年５月广巧中医巧大学学位论文原彻性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在

2、导师的指导下，独立进行研究工。作所取得的成果除文中已经特别加Ｗ注明引巧的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期：年月＾日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可Ｗ将本学位论文

3、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）？论文作者银名々廣喪论文导师签名］日期：年＾月么日７ｓ血小板血浆对巧疮巧巧押苗的抑苗作用及疗效研究摘要目的ｔｅｌｅｔｒｉｃｈｌａｓｍａＰＲＰ通过体外实验探索富血小板血浆（ｐｌａｐ，）对瘦疮丙酸杆菌的抑菌作用一；动物体内实验对其的疗效进行评估；进步联合点阵巧激光观察其治疗炎症性瘦疮的临床疗效；为ＰＲＰ的临床推广应用奠定基础。方

4、法１、ＰＲＰ对瘦疮巧酸杆菌的巧苗作用：－一（１）ＰＲＰ的制备：①全血样品留取：用邸ＴＡＫ２的次性无菌真空管抽取受试者静１０ｍｌ）生凝集或溶血另单独抽取１管血液（１ｍｌ）脉血（，缓慢海匀，Ｗ避免红细胞发；一巧ＯＯｒｎ用于全血常规检测。②全血中血小板分离：第次离也转速选择ｐｍ／ｍｉ、时间一１ｍｌ无菌注射器抽取富含血小板层血浆为ｌＯｍｉｎ。第次离也后，，在超净台内，用一即ＰＲＰＰＲＰ进行血小板计数检测。⑤调整ＰＲＰ中血小板的，并对第次离也后获得的一ＰＲＰ一次离也获得的分成两部分

5、，浓度；根据检测结果将第，部分留作重悬血小板一ｍｍｎｍｎ进行二次二另部分Ｗ３０００ｒｐ／ｉ、２０ｉ第离也。第次离也结束后，在超净台内，－一ｅｌｅｔｏｏｒｌａｓｍａ此得到的上清即贫血小板血浆（ｐｌａｔ，将上清转移置洁净离也管，ｐｐ阱Ｐ）；最后将剰余部分高度浓缩的血小板沉淀物用留置的ＰＲＰ重悬、充分混匀，进行血小板计数，再用ＰＰＰ调整血小板浓度至１０００Ｘ１０７Ｌ，即得到实验用富血小板血浆ａ－（ｐｌｔｅｌｅｔｒｉｃｈｐｌａｓｍａ，ＰＲＰ）。．ｌ＾）ｌＯＯｒａｌ纯水中议药敏纸

6、片的制备：将２片红霉素肠溶片（Ｏｇ压碎后溶于，‘磁力揽拌器混匀，窩压灭茜后，配制成终浓度为１．７皿〇１／１的红霉素溶液，放置４Ｃ冰箱保存１号定性滤纸Ｗ打孔器制作成直径，备用。选取吸水性强、质地均匀的新华６皿１的圆形纸片。６ｍｍ的，高压灭菌，保存备用在超净工作台内，将直径无菌滤纸片分别浸入ＰＲＰ、ＰＰＰ和红霉素溶液中，３０ｍｉｎ后取出，制成ＰＲＰ药敏片、ＰＰＰ药敏片和红霉素药敏片，阴干，备用。（３）ＰＲＰ对瘦疮丙酸杆菌（ＡＴＣＣ６９巧）的抑菌试验；将复苏活化的痊疮丙酸杆菌标

7、准株接种于厌氧脑也浸液平板，放入厌氧罐（充进１〇％饼２，１０％屯８０％化），置‘她一４如于３７Ｃ恒温恒湿培养箱培养４。用次性无菌棉签挑取厌氧培养的瘦疮丙酸杆。０．５茵浸于无苗生理盐水中，制成细菌混悬液用麦氏比浊仪将菌液浓度调节为麦氏８一单位（即１．５Ｘｌ〇ＣＲＪ／ｍｌ）备用。用次性无菌棉签沾取菌液，均匀徐布于厌氧脑－ｍｎ也浸液平板２３ｉ。、ＰＲＰ药敏，干燥用无菌摄子分别将红霉素药敏片（阳性对照）Ｉ片巧ｐｐｐ药敏片（阴性对照）平贴于涂布菌株的厌氧脑也浸液平板上，放入厌氧罐（充

8、’：进１０％Ｃ〇２，１０％Ｈ８０％Ｎ２），３７Ｃ恒温恒湿培养箱培养４８ｈ，取出，观察结果。２，置于２、ＰＲＰ对瘦疮动物模型治疗作用的实验研究（１）兔耳瘦疮动物模型的建立：取２６只新西兰大白兔，随机分为２组，其中正常对照组３只，不作处理；余下的２３只新西兰大白兔作为造模组，在兔的右外耳道上，每天用化５ｍｌ的注射器均匀涂布５０％油酸０．巧ｍｉｌ次，于造模第７ｄ时将瘦疮丙酸杆菌菌悬液８０（１Ｘ１０用灭菌生理盐水校正至．５麦氏比浊单位约