心肌缺氧复氧损伤中转录因子foxo4对自噬的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512410南昌大学硕士研究生学位论文心肌缺氧复氧损伤中转录因子FoxO4对自噬的影响EffectoftranscriptionfactorFoxO4onautophagyinmyocardialhypoxia/reoxygenationinjury高仪培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：程晓曙教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（心血管）论文答辩日期：2015年05月答辩委员会主席：评阅人：2015年05月一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知

2、，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有

3、限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：观察心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）损伤情况下转录因子FoxO4对细胞内过度自噬的影响，探讨其可能的机制，从而揭示转录因子FoxO4在

4、心肌细胞H/R损伤情况下的作用。方法：1)以SD大鼠原代心肌细胞为研究对象，取出生1-3天的SD大鼠乳鼠心脏制备原代心肌细胞2)分别缺氧1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h，复氧0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h，通过westernblot检测LC3蛋白表达和乳酸脱氢酶（LDH）活性检测，选择出合适的缺氧和复氧时间点，建立缺氧复氧模型。3)确定好缺氧复氧条件在缺氧1h及复氧6h两个时间点上进行后，设立5个实验组：a)对照组：正常培养的原代心肌细胞；b)H/R组：原代心肌细胞培养5天后进行缺氧复氧处理；c)H/R+阴性干扰病毒组：原代心肌细胞培养2天后，转染阴性干扰病

5、毒，转染3天后进行缺氧复氧处理；d)H/R+空载病毒组：原代心肌细胞培养2天后，转染空载病毒，转染3天后进行缺氧复氧处理；e)H/R+FoxO4-RNAi组：原代心肌细胞培养2天后，转染FoxO4-RNAi病毒，转染3天后进行缺氧复氧处理；f)H/R+FoxO4组：原代心肌细胞培养2天后，转染过表达FoxO4病毒，转染3天后进行缺氧复氧处理。4)通过Westernblo检测各组FoxO4、LC3、p62蛋白表达情况，并检测各组LDH活性。实验数据采用均数±标准差(xs)表示，通过统计软件IBMSPSSStatistics20进行t检验，结果以p<0.05认为有显著性差异。结果：1)心

6、肌细胞经缺氧处理1h、3h、6h、8h、12h、14h、24h后，与正常对照组相比，LC3蛋白表达均有升高，在1h上升最明显（p<0.05）；上清中LDH活II摘要性均有升高，与正常组相比均有显著性差异（p<0.05）。2)心肌细胞经缺氧1h复氧0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h，在复氧6h表达最明显（p＜0.05）；上清中LDH活性均有升高，与正常组相比均有显著性差异（p<0.05）。3)分别转染FoxO4-RNAi、FoxO4慢病毒表达载体72h后，对心肌细胞进行H/R处理。H/R组与正常对照组相比，H/R组的LDH活性有显著升高（p<0.05），差异有统计学意义。与H/

7、R组相比，H/R+FoxO4组LC3表达、LDH活性均有显著升高（p<0.05），p62表达有显著降低（p<0.05），差异均有统计学意义；H/R+FoxO4-RNAi组LC3表达、LDH活性均有显著降低（p<0.05），p62表达有显著升高（p<0.05），差异均有统计学意义。结论：1)LC3在正常SD大鼠原代心肌细胞中表达较低，缺氧复氧损伤下LC3在心肌细胞中的表达增加，在缺氧1h、复氧6h时表达增加最为明显，并以此作为本研究的模型。2)缺