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1、湖北工业大学硕士学位论文鱼废料制备低聚肽工艺研究姓名：王金申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：万端极20100501湖北工业大学硕士学位论文摘要本文以低值鲢鱼及其废料为原料，采用双酶水解结合膜技术制备具有较高附加值的生物活性低聚肽，探讨了双酶水解过程中水解度与水解时间的关系模型，并对水解产物的抗氧化活性和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性进行了初步研究。单酶水解鲢鱼蛋白结果显示，Protamex、Alcalase和风味酶较适合鲢鱼蛋白酶解；单因素实验结果表明，Protamex、Alcalase和风味酶最佳水解条件分别为：最适
2、底物浓度均4.5%，最佳pH7、7.5、7，水解时间180min、120min、120min，加酶量（酶与底物蛋白质量比）3%、3%、4%，温度50℃、55℃、50℃，每种酶在最佳条件下水解度分别为：17.7%、20.2%、19.3%，氮利用率分别为：86.1%、92.4%、92%。在蛋白酶最佳水解条件下，以水解度（DH）、氮利用率和分子量分布为指标，通过单因素试验比较了3种双酶组合的水解效果，综合考虑确定Protamex、Alcalase为最佳双酶组合。此最佳水解体系下DH为21.9%，氮利用率为95%，分子量98%分布在100
3、0Da以下。探讨了Protamex、Alcalase双酶水解鲢鱼蛋白体系水解度与时间关系模型，确定了模型参数。经实验验证、数据拟合和理论推导，确定双酶恒温水解鲢鱼蛋白体系水解度DH与时间t关系符合模型：DH=1/bIn[1+a×b×t]，其中参数a=1.03356e/s-0.19043，b=0.23449，e/s为加酶量与底物蛋白质量百分比。对水解物抗氧化性和ACE抑制活性进行初步研究。结果表明各水解度下酶解液均表现出较好的清除羟基自由基（·OH）能力，其中DH20%组分表现出最佳清除率；对于总抗氧化性，当水解度为25%时其总抗氧
4、化能力较差，DH5%总抗氧化性最佳；各水解度下水解液对ACE均有抑制作用，以DH20%的水解液ACE抑制率最高。研究不同微滤膜和纳滤膜对鲢鱼蛋白水解液的影响，确定微滤膜Ⅱ和纳滤膜Ⅱ效果较好。数据显示微滤膜Ⅱ除杂率好，低聚肽纯度提高4%左右；纳滤膜Ⅱ使酶解液浓缩9.3倍，纯度提高到94.2%。关键词：酶解，鱼废料，低聚肽，膜技术I湖北工业大学硕士学位论文AbstractInthispaper,studyonpreparinghighervalue-addedbioactiveoligopeptidebydouble-enzymesh
5、ydrolysistechniqueandmembranetechnologyfromlow-valueHypophthalmichthysmolitrixandfishwastewerecarriedout,thekineticmodelbetweendegreeofhydrolysis(DH)andhydrolysistimeintheprocessofdoubleenzymatichydrolysiswasdiscussed,andalsoapreliminarystudyofantioxidantactivityandan
6、giotensin-convertingenzyme(ACE)inhibitoryactivityofhydrolysateswerecarriedout.Thestudyonsingle-enzymatichydrolysisofHypophthalmichthysmolitrixproteinshowedthatProtamex,AlcalaseandFlavorzymeweremoresuitableforHypophthalmichthysmolitrixenzyming,single-factorexperimentre
7、sultsshowthattheoptimalhydrolysisconditionsofProtamex、AlcalaseandFlavorzymewereasfollows:theoptimalsubstrateconcentrationwasall4.5%,thebestpHwere7,7.5,7,hydrolysistimewere180min,120min,120min,theamountofenzyme（massritioofenzymeandprotein）were3%,3%,4%,temperaturewere50
8、℃,55℃,50℃respectively,DHwere17.7%,20.2%,19.3%andnitrogenutilizationwere86.1%,92.4%,92%respectivelyinthebestconditionsofeachp
