中国甜菜坏死黄脉病毒群体遗传结构分析及p25突变体的构建

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1、分类号：单位代码：密级学号：阁十大博士学位论文中国甜菜坏死黄脉病毒群体遗传结构分析及突变体的构建研宄生：卓娜指导教师：弛国珍敎授韩成贵教授合作指导教师：申请学位门类级别：农学博士专业名称：植物病理学研宄方向：植物病毒所在学院：农学与生物技术学院年月Ph.D.DissertationAnalysisofGeneticStructureofChineseBeetnecroticyellowveinviruspopulationandConstructionofp25MutantsCandidate:NaZhuoSupervisor:Prof.Guo-

2、zhenZhangProf.Cheng-guiHanMay2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年（月日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部

3、门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：广年（月七导师签名时间：年月摘要甜菜坏死黄脉病毒是甜菜丛根病（的病原，在世界各甜菜产区广泛发生。丛根病的防治主要依赖抗性甜菜品种，然而欧美一些国家已经出现了抗性突破（变种。蛋白第位氨基酸是基因组中变异最大的区域，可能与病毒的特性有关。为明确中国群体的发生及流行特点，本研究采用技术对中

4、国各甜菜产区釆集的甜菜及土壤样品进行了检测，并对中国的遗传变异及群体遗传结构进行了分析。同时，构建了新发现的突变体的侵染性克隆，为研究中国分离物的致病性以及病毒寄主互作机理打下基础。此外，还整理分析了“内蒙古自治区甜菜品种区域试验”供试甜菜品种的检出率，为抗（耐）性甜菜品种的筛选及推广提供重要的参考依据。所获得的研究结果如下：釆用技术，对年从中国省（自治区）采集的份甜菜样品和份土壤样品进行了检测，分别有份甜菜样品和份土壤样品检测结果呈阳性，检出率分别为和对其中个阳性样品的、、及全长序列进行测定。每个分离物的每种基因组片段至少测个克隆，以期研究每个

5、分离物的分离物内多样性。本研究测定的，及序列存在不同程度的长度变异，尤其是其序列长度为。序列分析结果表明，一些分离物是不同类型或含有不同的变种的混合侵染。本研究中共发现了种基序，其中种为世界首次报道。基于个基因（、和的系统发生分析结果表明，全球分离物被分成组，这与之前的报道结果相似。在和树中分别鉴定出由中国分离物组成的两个新亚组和一个新组。选择压力分析结果表明，中国群体的蛋白处于正选择压力，而另外三个蛋白处于负选择压力。以省为单位的群体之间存在频繁的基因流，表明这些群体之间不存在遗传分化。这些证据表明，选择和基因流是影响中国群体形成的重要因素。根

6、据中国分离物的变异特点，构建了种突变体的侵染性克隆。将这些突变体的体外转录物与和的体外转录物混合后摩擦接种番杏叶片。接种天后，接种不同突变体的叶片表现出一定的症状表型差异，表明这些突变体可能具有不同的致病能力。同时，将这些突变体全长序列克隆到农杆菌表达载体载体中，并与具有相同载体背景的与重组质粒等比例混合，通过农杆菌浸润接种本生烟。接种天后，不同突变体接种的本生烟接种叶呈现不同程度坏死。接种天后，不同突变体接种的本生烟上位叶呈现不同程度的黄化。检测上位叶，结果表明这些突变体均可以系统侵染本生烟。利用技术，对年《内蒙古自治区甜菜品种区域试验》供试甜

7、菜品种进行了检测。不同年份甜菜品种个数分别为：年个、年个、年个、年个以及年个。结果表明，抗病鉴定圃的总检出率在不同年份的波动性不大。而普通试验田的总检出率，除年异常高之外，有逐年上升的趋势。在所有供试品种中，绝大部分为感病或中感品种。抗性或中抗品种极少。本研究鉴定的抗性或中等抗性品种中，大部分来自德国公司，其次是美国公司，而来自中国科研机构的品种只有个。关键词：甜菜坏死黄脉病毒；群体遗传结构；突变体；侵染性克隆；抗性评价AbstractBeetnecroticyellowveinvirus(BNYW)isthecasualagentofRhizo

8、maniaonsugarbeet,whichwaswidelydistributedinsugarbeetgrowingregionsw