油橄榄黄酮合成途径中三个关键酶基因的克隆及苯丙氨酸解氨酶基因的表达研究

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1、２Ｓ２０５分类号０８１学号１２１１０？．四川农业大学硕ｄｒ学位论文＝油巧巧黄函合成途毎中个关键巧基因的克隆及苯巧氨巧解氣巧基因的表达研究陈文拴＇？．■、Ｉ—指导教师黄乾明教授学科专业生物化学与分子生物学研究方向暮因工程－？■．．■．．■．．．？－Ｊ１．，２０１５年５月，ｒ＇．．．－．＇＾一古．Ｉ？．Ｓｉｃｈｕａｎ乂ｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｅｒｓｉｔｙＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉ

2、ｔｔｅｄｉｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＳｔｕｄｏｎＣｌｏ凸ｉ凸ｇｏｆｔｈｅＴｈｒｅｅＫｅＥｎｚｍｅｓＧｅｎｅｓｉｎＦｌａｖｏｎｏｉｄｙｙｙＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓＰａｔｈｗａｙａｎｄＥｘｒ的ｓｉｏｎｏｆＰｈｅｎｌａｌａｎｉｎｅＡｍｍｏｎｉａｐｙＬｙａｓｅＧｅｎｅｆｒｏｍＯｌｅａｅｕｒｏｐａｅａＢｙＣｈｅｎ－ｓｈｕａｎＷｅｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ－．Ｈｕ

3、ａｎｉａｎｍｉｎｇＱｇ，ＹａａｎＳｉｃｈｕａｎＭａｙ２０１５论文独创牲声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其他一教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：义年月《日食也／关巧攸側授棚声明本人完全了解四川农业大学有关

4、保留、使用学位论文的规定，即；学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：年／（教也如知《曰导师签名多如八年Ｊ月／穿日＾炒；！摘要ｅ〇一油橄揽（饼［ｅｗｏ／ｗｅｆｌＬ．）属于木犀科（Ｏｌｅａｃｅａｅ），是世界上巧重要的优质木本油料树种。油橄揽果实经压巧所得的橄揽油是目前世界上公认的最为健康的食用＂

5、＂＂油，具有极佳的天然保健功效与美容功效，被誉为液体黄金、植物油皇＂一后。油橄揽中富含的黄丽是类多敌化合物，在植物生命活动中发挥着重要的生理功能，此外还可Ｗ作为药物具有多种药理作用，因此具有十分重要的开发潜力和研巧价值。黄爾类化合物是植物苯丙焼代谢途径中的次生代谢物，苯丙氨酸解氨酶ｈｅｎｌａｌａｎｉｎｅａｍｍｏｎｉａｌａｓｅＰＡＬ、査尔兩合酶ｃｈａｌｃｏｎｅｓｔｈａｓｅＣＨＳ和査尔丽异（ｐｙｙ，）（ｙｎ，）构酶ｃｈａｌｃｏｎｅｉｓｏｍｅｒａｓｅＣＨＩ是黄丽合成代谢途径中的Ｈ个关键酶，（

6、，）对植物中黄厕类物质的积累有重要的作用。本实验综合运用同源克隆、反转录聚合酶链式反应ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｏｒ－（ｌｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｅａｃｔｉｏ凸ＲＴＰＧＲ、融合引物嵌套ＰＣ民（ｆＵｓｉｏ凸ｐｐｙ，）＇ｐｒｉｍｅｒａｎｄｎｅｓｔｅｄｉｎｔｅｇｒａｔｅｄＰＣＲＦＰＮＩ－ＰＣＲ与３－ｃＤＮＡ末端快速扩增ｒａｉｄｊ）（ｐａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄＲＡＣＥ，王、ｐ，）等分子生物学技术分别从油橄槐中克隆到Ｃ好Ｓ、ＣＭ的全长ＤＮＡ与ｃＤＮＡ，

7、并进行了相关的生物信息学分化三个基因分别命名为０６戶Ａｔ、＜９ｅＣ片Ｓ、月７。此外，还对克隆到的饼尚王在毕赤酵母Ｘ３３中进行了诱导表达，且进行了相关的酶学性质研究。得到如下主要研究结果。一￣１．Ｏｅｉｉ化的ＤＮＡ全长２９７０ｂｐ，含有个内含子３９３１２２０ｂ，全长ｃＤＮＡ有（ｐ）２１４２ｂｐ，开放阅读框编码７１３个氨基酸，且与其他植物有较髙的同源性。氨基酸序ＰＡＬＨＮＯＳ列分析显不，Ｏｅ属于稳定性蛋白，分子式为Ｃ３４２４，等电点为５４９０９４４１０５２２５２Ｍ２５３２５４５，．８３不含信

8、号肢序列、Ｌ、Ａ；所编码的多化链中有４个脱氨位点乐气Ｖ）５７８沪９３８０８１３９３吐４８４４８５和１１个催化活性位点肿、炉、、〇、妒、Ｈ、ｎ、ｑ、４８６＊８７ＤＶ５６－、．５２％５．６１％３０．８６％，且包含的ａ螺旋、的片转角和的无规则卷曲。利）用该基因构建的重組质粒ｐＰＩＣＺａ王成功地在毕赤酵母Ｘ３３中进行了表达。