瑟氏泰勒虫p33基恩与牛il-18基的串联表达

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1、？－．，．ｆ、１１学校代码：０８４分类号：？皆农学硕壬学位论文‘－．Ｉ瑟氏泰勒虫ｐ３３基因与牛１＾１８基的串联表达＇１，．Ｖ；．．’、，ＴＨＥＩＬ臣ＲＩＡＳＥ民ＧＥＮＴＩｐ３３ＧＥＮＥＡＮＤＣＡＴＴＬＥ－ＴＡＮＤＥＭＥＸＰＲＥＳＳＩＮＴ巨民ＬＥＵＫＩＮ１８ＩＯＮ海旭南预防兽医学＾延边大学０８４学校代码；１１分类号；农学硕±学位论文３３基因与牛比－瑟氏泰勒虫ｐ１８基的串联表达＾－Ｔｈｅｉｌｅｒｉａｓｅｉｅｎｔｉ

2、３３ｅｎｅａｎｄｃａｔｔｌｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１８ｇｐｇｔａｎｄｅｍｅｘｒｅｓｓｉｏｎｐ海化南预防兽医学延边大学？？分类号密级－ＵＤＣ学号２０１２０１０５２１延过大聲硕女学位论文瑟氏泰勒虫３３基因与牛ｍ－１８基因的串联表达ｐ研兜生姓名海旭南错养单位延边大学农学院指导教师姓名、职棘许雇天教授単科专化预防兽医学研免方向动物寄生虫病学论文提交曰期２０１５年６月本论文已达到农学硕±学位论文要求１—．．；

3、爭Ｐ户；答辩委员会主席＃钟責货卽）ｔＳ？？＊＊＊＇＂＊？＊２ａｕｃ＊５ｍ答辩委员会委员ｙ則答辩委员会委员麥答辩委员会委员＿＿／（印）答辩委员会委员（印）延边大学２０１５年６月１日学位论文独创性声明郑重声明：本人所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。就我所知，论文中除了特别加标记和致谢的部分外，不包含其他人臣经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人為获得任何教育化构的学位或学历而使用过的材料一。与我同工作的同事对本研究所做的任何贡献均

4、已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如违反上述声明一，本人愿意承捏由此引发的巧责任和后果。￣研究生签名曰期苗例５年月曰／学位论文使用授权声明本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可Ｌ义借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容Ｌ，可乂向有关部口或化构送交并授叔其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理．本学位论文属于：１．保密□，在解密后适用于本声明２．不保密石；；研究生签名；巧签名；日期乂？月

5、雜和是是／片／？？＇延边大学硕±学芭毕业论文一廊要摘要瑟氏泰勒虫（巧ｅ能化ｗｅ巧ｅｒｔ＂）是泰勒科、泰勒属的血液原虫，寄生在红细胞内。感染泰勒虫的牛主要表现为慢性贫血、高热、消瘦和淋己结肿大等临床症状，感染泰勒虫的牛只由于贫血导致免疫力下降，极易引起其他血液性疾病的病原体的继发感染，进而导致死亡率的升高，给养牛产业造成不可避免的经济损失。近年来，瑟氏泰勒虫的发病率在全国范围内的各，随着中国牛养殖业的蓬勃发展个地区呈从惊人的速度呈上升趋势，给全国各地区的养牛产业造成巨大的

6、经济威胁。。因此，有效控制瑟氏泰勒虫的发病率成为当务之急本试验将瑟氏泰勒虫主－要表面抗原ｐ３３基因与牛白细胞介素１８（比１８）基因进行重组表达，结果表明表－－巧具有相当好的反应原性达出的重组蛋白正１８Ｐ。一瑟氏泰勒虫的ｐ３３基因是瑟氏泰勒虫的主要表面蛋白之，能够引起宿主的良好的特异性免疫反应。根据ＧｅｎＢａｎｋ上已经发表的ｐ３３基因序列ＧｅｎＢａｎｋ：［ＤＱ０８－７８２６４Ｊ白细胞介素１基因序列（正１８）ＧｅｎＢａｎｋ：５１；５７４９０９＾分别设计］［］两对特异性引物。提取感染瑟

7、氏泰勒虫牛的阳性抗凝血液ＤＮＡ，并Ｗ血液ＤＮＡ为模板应用聚合酶链式反应技术（即ＰＣＲ技术）扩增得到大小为８２１ｂｐ大小左ＭＤ－－－正－ＤＮＡ右的目的片段。提取ｐ１８Ｔ１８质粒ＤＮＡ，Ｗ该质粒为模板，通过ＰＣＲ６２７ｂ－ＰＣＲ技术将两段基因串联技术目的片段。应用ＳＯＥ，，得到大小为ｐ－反得到串联基因正１８平３３，大小为１４１６６口。将经８０？壬〔技术得到的串联基因ＭＤ－９－Ｔ片段与ｐ１ｓｉｍｐｌｅ载体连接，然后转化至大肠杆菌的克隆茵种ＤＨ５ａ。提取质粒ＤＮＡ，质粒ＤＮＡ经过ＰＣＲ、

8、说》泪Ｉ，诚０Ｉ双酶切和测序确定串联基－－－－因比１８ｐ３３成功与ｐＭＤ１９Ｔｓｉｍｐｌｅ载体连接后，将该重组质粒命名为－－－－－ＭＤ－－ＭＤｐ１９ＴＩＬ１８ｐ３３？将质粒１９ＴＩＬ１８３３和原核表达载体ＰＧＥＸ４Ｔ１经过ｐｐ８－３３ＧＥＸ－４Ｔ成７？姐Ｉ和訊０Ｉ巧酶切，分别回收酶切后的正１和１的目的条带ＰＰ，‘然后进行１６Ｃ过夜连接，并转化至大肠杆茵表