外周血循环微颗粒检测方法的建立及其临床应用研究

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1、ASOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目研究生姓名指导教师姓名专业名称研究方向论文提交日期学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学问论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。研宄生签名:学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学

2、位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档’允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文k论文作者签名：知’气,日期:”卜丨导师签名：日期：外周血循环微颗粒检测方法的建立及其临床应用研究中文摘

3、要外周血循环微颗粒检测方法的建立及其临床应用研究中文摘要目的：（1）建立流式细胞术（FCM）检测外周静脉血循环微颗粒（MPs）的实验方法。（2）探讨四种MPs在健康者及胃腺癌患者外周血中表达情况及其临床意义。（3）研究胃腺癌患者手术治疗过程中MPs变化趋势，明确手术治疗对外周血MPs表达水平的影响。探讨急性胰腺炎（acutepancreatitis,AP）患者外周血内皮细胞微颗粒（EMPs）的表达水平及治疗前后变化。方法：（1）FCM检测MPs方法的建立：抽取空腹外周静脉血，以枸橼酸钠抗凝（1:9，含PGE1终浓度为300n

4、M），4℃下3000rpm15min离心两次，制备乏血小板血浆（PPP），用藻红蛋白（PE）标记的四种特异性荧光抗体（CD61、CD142、CD62e、CD235a单抗），分别标记四种相应微颗粒：血小板微颗粒（PMPs）、组织因子阳性微颗粒（TF-MPs）、EMPs和红细胞微颗粒（RMPs），以1.0um的标准微球设定前向检测区，大小在0~1.0um之间、PE标记阳性的微粒为目的微颗粒。（2）健康者及胃腺癌患者MPs表达检测：选取30例健康志愿者及我院收治的85例确诊为“胃腺癌”患者，制备PPP并检测MPs表达。（3）手术对

5、MPs水平的影响：所选取胃腺癌患者分别于术前、术后第1天、术后1周及术后1月抽取空腹外周静脉血，检测四种微颗粒并动态观察其变化，为手术对MPs表达的影响提供一定依据。检测AP患者EMPs表达水平及治疗前后变化。结果：（1）30例健康者PMPs、TF-MPs、EMPs及RMPs表达水平分别为（92.1±65.5/ul）、（37.6±18.6/ul）、（197.2±80.3/ul）和（27.6±12.0/ul），PMPs与EMPs表达量占四种MPs总和的81%。（2）胃腺癌患者PMPs、TF-MPs、EMPs和RMPs表达水平分

6、别为（169.9±81.4/ul）、（65.4±36.7/ul）、（178.06±119.42/ul）、（46.2±32.8/ul），其中PMPs、TF-MPs及RMPs表达水平与健康者对比有统计学差异（P<0.05），EMPs表达在健康者与胃腺癌患者之间无统计学差异（P>0.05）。增高的PMPs、TF-MPs表达水平与胃腺癌TNM分期相关，III期及IV期较I、II期高Ⅰ中文摘要外周血循环微颗粒检测方法的建立及其临床应用研究（P<0.05），TF-MPs还与肿瘤脉管侵犯相关（P<0.05）。（3）胃腺癌患者术后第1天四种

7、MPs表达水平依次为（608.9±407.1/ul）、（135.2±151.8/ul）、（733.5±744.4/ul）、（78.0±73.6/ul），与术前相比有统计学差异（P<0.01），术后MPs表达水平逐渐降低，至术后1月四种MPs表达水平依次为（110.7±90.7/ul）、（42.2±29.5/ul）、（186.9±104.2/ul）、（25.8±13.4/ul），与术前水平相比差异均有统计学意义（P<0.05），四种MPs水平与健康对照组相比无统计学差异（P>0.05）。急性胰腺炎患者EMPs表达水平为（584

8、.0±317.5/ul），较健康者明显增高（P<0.01），炎症治愈后EMPs水平恢复至正常（227.4±105.0/ul），与健康者相较无统计学差异（P>0.05）。结论：（1）采用流式细胞术检测外周血循环中微颗粒的方法具有科学可行性，标准化后的方法具有一定的科研和临床应用价值。（2）胃