探索酶法制备酪蛋白磷酸肽工艺开发

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时间:2019-03-21

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1、天津大学硕士学位论文酶法制备酪蛋白磷酸肽工艺开发姓名:邹超申请学位级别:硕士专业:化学工程指导教师:何志敏20021201摘要作为一种具有多种生理功能的活性多肽,酪蛋白磷酸肽(caseinphosphopeptides,CPPs)的酶法制各是近年来国内外研究的热点。目前所报道的CPPs生产工艺大多采用间歇酶促水解,反应转化率及产率均较低,产物分离纯化和酶的一次性使用都极大的增加了生产成本。此外关于扩试生产的研究也少有报道。本文在前人工作基础上,首先采用工业级胰酶间歇水解酪蛋白,通过最优化方法确定了胰酶一酪蛋白反应体系

2、的最佳工艺条件,即:pH=8、T=40℃、[S]_2.O%、[E]:[s].1:20、t=2.5h。在间歇实验的基础上继续研究了连续反应一膜分离耦合技术,通过实验摸索得到影响连续反应一膜分离耦合工艺的关键因素,并结合生产效率确定了最佳操作条件,即:pH=8、T=40℃、V=1000mL、J=4.0mL/min、s=209/r、E:S21:20。利用双膜法和树脂法对所得产品进行纯化,通过与传统Ca”一乙醇沉淀法比较,得出了不同纯化方法的操作条件和适用范围。同时,对不同方法所得产物进行色谱分析,并对各套纯化工艺进行了评价

3、。最后本文在小试实验的基础上,分别进行了间歇和连续的扩试开发试验。通过自行设计和组建的扩试反应装置,不仅获得了可供工业化参考的操作参数,而且为本项目的工业化生产提供了较为充分的设计依据。扩试产品经检测,基本满足项目要求:不同级别问歇产品结果检测关键字:酪蛋白磷酸肽酪蛋白酶解胰酶酶膜反应器扩试开发ABSTRACTSincecaseinphosphopepetides(CPPs)possessalotofbiologicalproperties,thepreparationofthemhasbecomeared—hotr

4、esearchdirectioninthefieldofbiotechnology.However,themostresearchersadoptedthebatchreactionprocesst。prepareCPPs,whichleadstothelowproductyieldandthehi曲productioncost.Moreover,thestudyofscale·upexperimentsisalsoseldomreposed.Onthebaseoftheformerresearch,thepancr

5、eatinisappliedtohydrolyzethecaseininabatchreactorandtheoptimumoperationconditionsofpancreatin—caseinsystemareconcludedbyoptimization:pH=8、T=40"C、[s】22.O%、[E]:[s]=l:20、t=2.5h.Thenthecontinuousreaction-membraneseparationtechniqueisstudiedonthebaseofbatchexperimen

6、ts.Takingintoaccounttheproductionefficiency,theoptimumoperationconditionsarealSOobtained:pH=8、T=40℃、V=1000mL、J=4.0mL/min、s=209a。、E:S=l:20。Inordertopurifytheseactivepeptides,theduel—membraneandresinmethodsareapplied.ComparingwithtraditionalCa2+一eth觚oIprecipitati

7、onmethod.itisdrawnthatdifferentpreparationproceduresfittOdifferentconditionsandscopes.Furthermore,HPSECisusedtoanalyzetheproductsafterpurificationforevaluatingthedifferentpurificationmethods.Batchandcontinuousscale—upexperimentsarecarriedout0nthebaseofaboveexpe

8、riments.Makingnseofthesol,madeequipment,operationdataandtechnologyprocedureforindustrializationarecollected.Accordingtothem,thecorrespondingmassproductionequipmentcanbealsod

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