老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究

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1、老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔蘇关系的临床研究老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔辭关系的临床研究［摘要］目的探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，为临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据。方法32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组;另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例，为对照组；进行样本制备和垂直电泳处理，观察两组样本的CK阳性情况。结果研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组，而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组

2、(P〈0.05)o结论口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔蘇的发病有一定相关性，CK2、CK4、CK5的浅表达和CK10、CK13、CK14的过表达，影响上皮细胞组织的增殖、分裂、角化等，进而影响0LP的发病。［关键词］老年患者；口腔细胞角蛋白；口腔扁平苔鳏；相关性［中图分类号］R781.5［文献标识码］B［文章编号］1673-9701(2013)25-0149-02老年人体质差，易发生各类口腔感染。口腔扁平苔鉢(0LP)是一种较为常见的口腔内慢性非感染性病变，主要发病于口腔黏膜，表现为上皮的过度角化，可累

3、及口腔颊、牙齿、舌等其他部位的黏膜组织，属于免疫反应性疾病的一类［1］。目前临床对0LP的治疗比较困难，易反复且有恶性倾向，被世界卫生组织(WHO)列入到癌前状态范畴中。研究表明，细胞角蛋白(CK)与上皮角质细胞的增殖具有相关性［2］。CK属于角质细胞中的骨架性蛋白，多于上皮细胞中表达,具有组织分化的特异性和高度保守性［3］o为探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，给临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据，早期遏制癌变，笔者选取我院自2011年6〜12月间收集的OLP标本共32例，现报道如下。1资料

4、与方法1.1临床资料32例病例样木來源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组，其中男18例，女14例；年龄60〜82岁,平均(69・4±5・3)岁；排除服用激素类药物患者和有口腔黏膜病变者。另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例为对照组，其中男15例，女15例，年龄60〜78岁，平均(66・2±4・8)岁。1.2方法1.2.1仪器与试剂采用北京天诚活德牛:物技术有限公司提供的DYY-12C型号电泳仪，由同厂提供的DYCZ-30型夹芯式垂直电泳槽。紫外可见分光光度计由上海

5、精密仪器仪表有限公司供应，型号UV-3200PCGLPo聚偏二氟乙烯(PVDF)膜由美国BIO-RAD伯乐公司生产。鼠抗人广谱细胞角蛋口(P-CK)单克隆抗体由上海丽臣牛物科技有限公司供应，配有ELISA试剂盒。辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG由上海万安生物科技有限公司提供。DAB染色试剂盒由北京赛驰生物科技有限公司提供。1.2.2样本制备取两组口腔黏膜标本各分为2份，一份行病理学IIE染色验证确诊，一份行样本制备与检测。将口腔黏膜标本置入浓度3mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)无钙镁磷盐缓冲

6、液中，置于37°C环境下静置2h后取出，利用显微外科组织镶在10X4倍的观察视野下分离上皮组织。分离后的上皮组织置入碾钵中，加入液氮研磨至粉末状，再加入高盐缓冲液lmL,于4°C环境下匀浆1h后，移入离心管进行离心处理10min,转速5000r/min,弃除上清液后，将沉淀物重悬于低盐缓冲液中，继续混匀搅拌，于4°C环境下移入离心管离心处理5min,转速5000r/min,再次弃除上清液，将沉淀物以PBS洗涤5min,笫3次离心，转速5000r/min,弃除上清液，沉淀物加入细胞角蛋口溶解液1mL

7、后于沸水浴中搅拌7min,冷却后再行离心，离心后上清液用紫外分光光度计测定蛋白定量，蛋白浓度为2.5ug/uLo1.2.3电泳进行聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，凝胶上的样孔均匀分为两份，各放入5个样本，两份样本一一对应。两份凝胶一份使用考马斯亮蓝R250进行染色处理后观察色带变化情况，另一份应用Western杂交电泳处理，证实获得蛋口条带属于角蛋口。各样品槽内加样，浓缩胶5%,分离胶12%。电泳后将凝胶切取一半移至PVDF膜上，再使用封闭液封闭好，于4°C环境下静置过夜，次日加入抗CK抗体，静置于4°C

8、环境下过度，再以PBST液洗涤PVDF膜，反复3次后，加入辣根过氧化物酶，二抗标记，置于37°C环境下行2h振荡，取出后用PBST洗涤PVDF膜，反复3次，参照DAB染色试剂盒的相关说明进行显色处理。1.3统计学方法获得数据录入统计学软件包SPSS15.0中并建立数据库进行数据分析，计数资料采用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果分别对研究组和对照组检验样木中CK阳性率进行比较，两组计数资料CK2、CK4和CK5、CK10、CK13和CK14分别进行卡方检验，见表1,研