[复习]粗蛋白含量的测定

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1、油脂的检验与分析粗蛋白质的测定(凯氏半微量定氮法)测定原理凯氏法的基本原理是将含有蛋口质的样品与浓硫酸共热使其分解，其中氮元素变成钱盐。再经浓碱液作用，放出的氨气经硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定硼酸溶液所吸收的氨。计算出试样含氮量，乘以相关的蛋白质换算系数，即得打蛋白质的含量。消化：蛋口质与浓硫酸混合加热，蛋口质被炭化分解，其屮碳被氧化成二氧化碳，所含的氮则转变成硫酸较残留于消化液中。冇机物(含N、C、H、0、P、S等元素)+H2SO4CO2t+(NH4)2SO4+H3PO4+SO2t+SO31山于上述反应进行的很慢，消化需要很长时间，加入催化剂可加速反应。硫酸铜是

2、备用的催化剂，硫酸钾能捉高硫酸的沸点，常将它们混合使川，起加速氧化、促进冇机物分解的作川。蒸镉：消化所得的硫酸馁加碱蒸镭，氨就被释放岀来。(NH4)2SO1+2NaOH=2NHb・出0+Na2SO4NH厂H2()=NH31+H20生成的氨用硼酸溶液吸收。硼酸吸收氨后，指示剂颜色变化，再用盐酸滴定，直至恢复到原來的氢离了浓度为止，盐酸与样品中氨是等摩尔反应。2NH+4H,BO3=(NH4)2B4O7+5H20(NH4)2B4O7+2HC1+5H20=2NH4C1+4H3BO3由于各种蛋口质的含氮量通常为16%左右，将含氮量乘以蛋口质系数，即为粗蛋口质含量。试剂①浓硫

3、酸一过氧化氢一水混合液(2+3+1)。在lOOmL水中缓慢加入浓硫酸200mL,冷却后加入30%过氧化氢300mL,混匀备川，此液存放阴凉处可保存一个月。②混合催化剂o10g硫酸铜(CuSO4•5H2O)、100g硫酸钾、0.2g硒粉，在研钵中研细，通过孔径0.45mm筛，混匀后备用。③40g/100mL氮氧化钠溶液、2%硼酸溶液、0.Olmol/L盐酸溶液。④甲基红乙醇溶液：称取0.lg甲基红置于硏钵屮，加入少许95%乙醇，研磨溶解后加入75mL95%乙醇。⑤次甲基蓝乙醉溶液：0.lg次甲基蓝溶于80mL95%乙醇中，临用时将以上两液按2：1比例混合即成。在酸域

4、呈紫红色，PII=5.5时无色，在碱域呈绿色。仪器50niL凯氏烧瓶、lOOOmL圆底烧瓶、100mL锥形瓶、5mL(刻度0.0ImL)微量滴定管、50mL容量瓶、5mL移液管、凯氏蒸镭装置。操作方法①消化。川长条光滑纸称取试样0.2〜0.3g,精确到0.000lg(约含粗蛋白质10〜3()mg)肓接送入凯氏烧瓶底部，加混合催化剂lg,同时加入硫酸+过氧化值+水混合液3〜5mL,稍加振摇，斜置于电炉上。在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，切勿使瓶中泡沫超过瓶肚的2/3,待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。直至消化液呈浅蓝绿色的透明状时再继续加热沸腾lO

5、min,取出，待消化液冷却至室温后，加水至10-20mLo溶液温度降到室温后，将消化液移入50mL容量瓶屮，并川少量水将凯氏烧瓶冲洗3〜4次，洗涤液一并移入容彊瓶中，加水稀禅至刻度，混匀备用。◎蒸僻。凯氏微量蒸谓装置它是山蒸汽发牛•器、反应瓶、及冷凝管等组成，在大烧瓶8(容量1000mL)屮加入蒸係水4OOmL和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加儿滴酸液,使水呈紫红色，盖紧瓶塞，连接4、1、2并检查有无漏气。量取3()mL2%硼酸溶液，注入(lOOmL)三角瓶3内，作为承接器，加混合指示剂1〜2滴(溶液呈紫红色)，置于冷凝竹2下面，使管尖端插入硼酸溶液1cm深处。

6、用5niL移液管吸取5mL(V)试样稀释液，由漏斗5注入蒸憎瓶1内，再倒入蒸谓水10mL冲洗漏斗5。接着量取40g/100mLM氧化钠溶液10mL,由漏斗5注入蒸饰瓶1内，再川2〜5讥水冲洗漏斗5,旋紧活塞，此时蒸饰瓶1内溶液总体积应不超过容积的一半。打开电炉加热烧瓶8,打开簧夹7,关闭活塞6,使蒸汽通过回流管4进入蒸憎瓶1再由蒸憎瓶1经冷凝管2而流入三和瓶3,待三角瓶3内的溶液呈绿色时，开始记录时间，经2〜3min后，将三角瓶3放低，使冷凝管2下端离开液面，继续蒸饰lmin,然后用少量无CO2蒸憎水冲洗冷凝管2下端，蒸懈即告结束。蒸憎结束后，旋紧簧夹7断绝蒸汽。

7、这吋由于回流管4内蒸汽压立即降低，所以蒸镭瓶1内的液体则全部吸入回流管4内。然后打开漏斗5下的簧夹，注入蒸谓水40〜50mL于蒸溜瓶1内，关闭漏斗5卜•的簧夹，打开簧夹7,通入蒸汽加热洗涤蒸係瓶1,再断绝蒸汽，使洗涤I叫流至冋流管4屮，打开活塞6,将冋流管4屮废液弃去，关闭活塞6,为下次蒸汽做好准备。③滴定。0.Olmol/L盐酸标准溶液滴定三角瓶3屮的吸收液至出现淡紫色为止。记录所消耗盐酸标准溶液的体积(W)。空白试验除不加试样外，消化、蒸係、滴定操作与样品相同。结果计算粗蛋白质的干基含量按下式计算:(V2-V1)・CX0.0140X6.25W(%)=X100V

8、，mXV式