bdfacscalibur流式细胞仪培训手册

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1、---WORD格式--可编辑---BDFACSCalibur流式细胞仪FACS101Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本公司网站订阅FACSinformation电子报www.bdtwn.com.tw/bdb/index.html。如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载www.bdtwn.com.tw/bdb/10-5-3-1.html。如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载www.bdtwn.com.tw/bdb/10-5-4-1.html。一、BDFACSCalibur基本结构1.

2、1仪器本体：1.电源开关：在BDFACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。2.光学系统：BDFACSCalibur基本配有一支波长488nm的氩离子雷射以BDFACSCalibur基本型为例FSCDiode只收488nm波长散射光SSCPMT只收488nm波长散射光FL1PMT荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545nm）FL2PMT荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606nm）FL3PMT荧光光谱峰值落在深红色范围（波长>650nm）--WORD格式--可编辑------WORD格式--可编辑---FACS101Handb

3、ook-1–--WORD格式--可编辑------WORD格式--可编辑---3.仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。流速控制：LO：样品流速：12l/minMED：样品流速：35l/minHI:样品流速：60l/min功能控制：RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。）STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。P

4、RIME结束，仪器恢复STANDBY状态。4.储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器SheathFilter，及空气滤网Airfilter。请注意气路减压阀VENTTOGGLE之位置。--WORD格式--可编辑------WORD格式--可编辑---FACS101Handbook-2–--WORD格式--可编辑------WORD格式--可编辑---鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。装八分满鞘液筒，仪器可以运行大约3小时。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。鞘液筒盖上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。废液筒

5、：位于抽屉右侧，容积4升。筒上装有液面感应器，废液盛满时，仪器软件上会有显示。注意废液可能有潜在的生物传染性。鞘液过滤器：0.22m过滤器，去除鞘液中的杂质，保证进入流动室的鞘液是干净的。气路减压阀：沿箭头方向移动阀门开关，鞘液筒减压，气压恢复正常。在鞘液筒添加鞘液时，需要减压。空气过滤网：用于过滤冷却雷射的空气。5.上样品区：上样品区是样本管的上样位置。它包括三个部分，一个是进样针SampleInjectionTube，将样本输入流动室，还有就是支撑架TubeSupportArm、和液滴存留系统DropletContainmentSystem。进样针：是一

6、根不锈钢管，将细胞从样本针中吸入流动室。进样管外有一套管，是液滴保留系统的一部分。支撑架：用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。支撑架有三个位置：位于样本管之下的中位，样本管左侧或右侧。液滴存留系统：系统由支撑架、真空帮浦和外套管组成。当支撑架位于左侧或右侧位置时，真空帮浦就会启动，将液体从外管吸入废液筒内。上样时，须注意将支撑架位于中位，以避免过多样品被抽吸到废液筒内（当支撑架位于中位，真空帮浦停止工作）。更换样品时，让仪器保持RUN的模式，使得进样针可以反冲；切换到STANDBY模式前，确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到流动室中。--WORD格式--可编

7、辑------WORD格式--可编辑---FACS101Handbook-3–--WORD格式--可编辑------WORD格式--可编辑---1.2Macintosh计算机与打印机：准备您的细胞样品1.理想样品浓度调至1-10X105cells/ml？一般实验只需0.5ml的样品。2.细胞样品务必放至BDFALCON352052试管中，否则无法上机。3.上机前务必去除样品中之细胞团块，以防止管路堵塞？可使用附滤网BDFALCON试管(Cat.No.352235)或35-55m的尼龙筛网。4.供流式分析的样品是单细胞悬浮液，而且大部分样品都需经荧光染色。表面

8、抗原荧光染色的方法大致有两种：直接免疫荧光、间接免疫