（江苏专用）2020版高考生物第十一单元生物技术实践第39讲无菌操作技术实践讲义（含解析）苏教版

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1、第39讲　无菌操作技术实践[考纲要求]　1.微生物的分离和培养(B)。2.某种微生物数量的测定(C)。3.微生物的应用(B)。4.实验：微生物的分离与培养(b)。考点一　微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能①干热灭菌法是指将准备灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170℃下加热1～2h以达到灭菌的目的。②湿热灭菌法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，其使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。(2)培养基的配制①培养基的概念：是为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。②营养组成：一般

2、都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。此外，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的pH使之满足微生物生长的需要。③种类：天然培养基和合成培养基，前者的主要优点是取材便利、营养丰富、配制简便，缺点是营养成分难以控制、实验结果的重复性较差；后者的优点是化学成分及其含量明确，实验的可重复性好，缺点是配制繁琐、成本较高。(3)微生物的接种①接种：是指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。②常用的工具有玻璃涂布器、接种针、接种环等，在涂布平板接种时要用玻璃涂

3、布器，穿刺接种时要用接种针，在斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种时要用接种环。2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37℃恒温箱中培养大肠杆菌24h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4℃)保存。(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板制作的方法及注意事项a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁

4、。b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固后才能进行。②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。易混辨析　消毒和灭菌项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具等高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌(1)培养基一般都含有水

5、、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质(　√　)(2)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(　×　)(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(　√　)(4)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(　×　)(5)用涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落(　√　)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析：(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？提示　获得效果A的接种方法为涂布平板法，获得效果B的接种方法为平板划

6、线法。(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？提示　火焰附近存在着无菌区域。命题点一　微生物的培养和无菌技术分析1．(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可

7、以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是______________________________________________________________________。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达

8、到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________________________。答案　(1)可以　(2)在达到消毒目的的同时，营养物