《DNA重组技术》PPT课件

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1、定向基因改造设想设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三基因工程基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达什么叫基因工程？基因工程需要哪些基本工具?培育抗虫棉需要哪些工具？分子手术刀—限制性内切酶分子缝合针—DNA连接酶分子运输车—运载体第1节DNA重组技术的基本工具一、限制性核酸内切酶思考在自然界中有一些生物的

2、DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？细菌为什么不会因外源DNA的入侵而灭绝？识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。4000种。1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶黏性末端平末端内切酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？什么叫黏性末端？什么叫平末端？限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本

3、身的DNA？二、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针”１.作用：连接磷酸二酯键限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？E.coliDNA连接酶：连接黏性末端T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端２.DNA连接酶的种类DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位相同点双链单链在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键都能形成磷酸二酯键二者都由蛋白质构成假如目的基因导

4、入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？如果载体对受体细胞有害将怎样？三、基因进入受体细胞的载体—“分子运输车”1.载体的必要条件能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；有切割位点有遗传标记基因对受体细胞无害、容易分离比较容易得到能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。常用的分子运输车有哪些？小结基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有专一性(识别序列)切开DNA分子的磷酸二酯

5、键DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶运载工具具备的条件结构简单,大小适中能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具标记基因质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同种限制酶B.两种限制酶同种连接酶D.两种连接酶A练习2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD3.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进

6、行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C练习大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端。T磷酸二酯键1234512345A