重组DNA技术简介ppt课件.ppt

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1、资料分析我们能产人奶此例子实现了哪种生物的哪些性状在另外哪种生物中表达？性状的表达与我们从前学过的什么过程有关？要实现人的乳蛋白基因在牛中表达，要提前做哪些关键工作?基因工程操作的四个基本步骤1）提取目的基因2）目的基因与运载体结合3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测和表达基因工程(geneticengineering)所谓基因工程(geneticengineering)就是把外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表达的操作叫基因工程。基因工程可使另一种生物获得新的遗传性状或表达所需要的产物。1.1DNA重

2、组技术的基本工具DNA重组技术的基本工具准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）——限制性内切酶DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）——DNA连接酶基因转移工具（“分子运输车”）——基因进入受体细胞的载体限制性内切酶有何作用？哪里找？限制性核酸内切酶的作用（p4）：能识别特定核苷酸序列；从特定部位的两个核苷酸之间切开。是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成重组的DNA分子了?二、DNA连接酶——“分子缝合针”1、种类：2、作用部位：两类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶磷酸二酯键二、DNA连接酶——“分子缝合针”DNA连接酶连接黏性末端之间

3、的磷酸二酯键，形成重组的DNA分子。E.coliDNA连接酶：连接黏性末端T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链连接部位DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？双链单链在两DNA片段间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键运载体——就是要将目的基因导入到受体细胞中选择什么作为基因进入受体细胞的载体运载体满足什么条件？作为载体的必要条件能自我复制有切割位点能与目的基因结合能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达；有遗传标记基因对受体细胞无害、容易分离比较容易得到3、

4、基因的运输工具——运载体能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。练习在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）同种限制酶B.两种限制酶同种连接酶D.两种连接酶基因工程常用的受体细胞有（）(1)大肠杆菌（2）枯草杆菌（3）支原体（4）动植物细胞A.（3）（4）B.（1）（2）（4）C.（2）（3）（4）D.（1）（2）（3）不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习3)基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操

5、作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C练习大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。限制酶黏性末端黏性末端什么叫平末端？平末端是如何形成的？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目

6、的基因有几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性末端。限制性内切酶来自哪里呢？思考题：大多数来自于原核生物什么叫做分子杂交？分子杂交技术的种类有哪些？分别有什么应用？3、PCR原理①在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性②当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链③PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器多聚酶链式反应扩增DNA

7、片断高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化4、TaqDNA聚合酶的应用5、缓冲液需要为PCR反应提供的物质DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出6、PCR技术的特点7、细胞内和细胞外DNA复制环境的区别体内DNA的复制体外的模拟模板（母链）细胞内源

8、外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP细胞内源外源加入聚合酶细胞内源外源加入