细菌感染的病原学诊断

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1、细菌感染的病原学诊断（一）标本的采集要求：1.早期采集：尽量在发病早期、应用抗生素之前采集2.根据标本的种类及可能的目的菌的特性选择不同的标本采集方法3.无菌采集：严格无菌操作，采集后标本置于无菌容器，且不得接触任何抗菌物质和消毒剂4.标本采集要足量5.安全采集一、临床标本的采集与处理原则（二）标本的运送、保存与处理标本采集后应尽快送检，厌氧菌必须在2h内送检。1.床边接种2.置于保存液或转运培养基中送检3.针对可能存在的病原体的特点对标本进行冷藏、保温或保持厌氧状态进行送检4.标本送检过程中应注意安全不染色标本检查法染色标本检查法二、细菌

2、的形态学检查主要用于观察细菌的动力及其运动状态1.悬滴法2.压滴法3.毛细管法4.暗视野显微镜检查法5.相差显微镜检查法（一）不染色细菌标本的检查细菌染色标本的制作程序涂片→干燥→固定→染色（二）细菌染色标本的检查（1）单染色法只用一种染料色的方法制片→结晶紫1min→水洗→晾干、油镜检（2）复染色法革兰染色法（Gramstain）抗酸染色法（acid-faststain）（3）特殊结构染色法3.细菌常用的染色方法革兰染色法（Gramstain）方法（改良快速法）初染：结晶紫＋等量NaHCO33～5s，水洗媒染：碱性碘液3～5s，水洗脱色：

3、丙酮酒精3～5s，水洗复染：碱性稀释复红3～5s，水洗结果紫色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌原理方法（Ziehl－Neelsen染色法）初染：5％石碳酸复红加温染3～5min，水洗脱色：3%盐酸酒精1min，水洗复染：碱性美兰1min，水洗抗酸染色法（acid-faststain）结果红色：抗酸性细菌蓝色：非抗酸性细菌注意事项一张玻片只能涂染一份标本不能使用染色缸染色关键：脱色时间的长短特殊结构染色法荚膜染色（capsulestain）芽胞染色（sporestain）鞭毛染色（flagellumstain）细菌的接种与分离培养技术一、培养基（

4、culturemedium）（一）定义用人工方法将适合细菌生长需要的各种营养物质配制成的混合营养制品。营养物质氮源、碳源、无机盐类、生长因子等凝固物质琼脂、明胶、卵白蛋白等抑制剂抗生素、化学物质、染料等指示剂酚红、溴甲酚紫、中性红等（二）培养基的组成成分按用途分类基础培养基（basicmedium）牛肉汤、普通琼脂平板营养培养基（nutrientmedium）血琼脂平板、巧克力血平板鉴别培养基(differentialmedium)糖发酵管、KIA、MIU选择培养基（selectivemedium）SS琼脂、麦康凯琼脂特殊培养基（speci

5、almedium）厌氧菌培养基、细菌L型培养基（三）培养基的种类按物理性状分类固体（平板、斜面、高层）半固体液体（一）接种工具接种环与接种针二、细菌的接种与分离技术（二）细菌的接种方法1.平板划线分离法用于细菌标本的分离纯化。2.琼脂斜面接种法主要用于单个菌落的纯培养及保存菌种，也可用于某些生化鉴定试验的接种。3.穿刺接种法用于半固体培养基或KIA、明胶等具有高层的培养基接种。半固体培养基的穿刺接种可用于观察细菌的动力。用于各种液体培养基如肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等的接种。4.液体接种法5.倾注平板法细菌定量培养6.涂布法L棒涂布。增菌培养

6、、活菌计数、药敏试验等。四、细菌的培养方法1.需氧培养（普通培养）需氧菌或兼性厌氧菌在有氧条件下进行的培养普通孵育箱37C18~24h观察培养结果平板已接种好的斜面试管少数生长缓慢的细菌需要培养3~7d直至1个月才能生长。2.二氧化碳培养将已接种培养基置于5%~10%CO2环境中进行培养的方法。（2）烛缸培养：简单易行，不需特殊设备，尤其适用于基层实验室。（1）二氧化碳培养箱：能自动调节CO2的含量、温度和湿度。3.厌氧培养厌氧菌对O2敏感，培养过程中需造成低氧化还原电势的厌氧环境。物理法、化学法、生物法。厌氧罐培养法、气袋法、厌氧手套箱

7、法、需氧菌共生厌氧法等。五、细菌的生长现象细菌的菌落特征:菌落大小形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等）高度（突起、扁平或凹陷）边缘（整齐、波形、锯齿状、卷发状等）表面（光滑、粗糙等）湿润度（干燥、湿润等）透明度（不透明、半透明、透明等）颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、黄色或无色等）溶血性（α溶血、β溶血或γ溶血）特殊气味半固体观察动力阴性动力阳性表面菌膜生长均匀混浊生长沉淀生长细菌在液体培养基中的生长现象细菌的生化反应不同细菌具有不同的酶系统，对糖和蛋白质的分解能力不同，因而其代谢产物也各异。据此可利用生物化学方法检测这些代谢产物以区别和

8、鉴定不同细菌。原理1.糖（醇、苷）类发酵试验一、碳水化合物代谢试验用途糖发酵试验是鉴定细菌最常用的生化反应，特别用于肠杆菌科细菌的鉴定。2.氧化/发酵试验（O／F试验）又称葡萄糖