注射用双黄连对细菌生物膜影响研究

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1、注射用双黄连对细菌生物膜影响研究【摘　要】目的：建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜（BBF）的模型，考察注射用双黄连对BBF形成的影响及抑制作用。方法：在特定的条件、方法下分别对细菌单独培养和细菌与提取物共同培养，通过酶标仪测量其OD值来考察BBF的生长能力。结果：注射用双黄连对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌BDF的形成均有抑制作用。【关键词】双黄连；细菌生物膜；影响建立大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜（BBF）的模型，考察注射用双黄连对BBF形成的影响及抑制作用。1　BBF模型的建立1.1　大肠杆菌

2、BBF模型的建立1.1.1　菌种的复活将大肠杆菌冻干粉加入0.4mlNB培养基溶解后，放入37℃恒温振荡器（230～240转/分钟）中培养8小时，分装在离心管中，加入0.5ml的50%甘油，置于液氮中，于-80℃冰箱中冷藏保存。1.1.2　大肠杆菌BBF模型建立的方法将置于-80℃冰箱中的大肠杆菌划线于NB培养基的平板上，置于恒温培养箱中，于36℃3培养24小时。挑取平板上的单一菌落溶于5mlNB液体培养基中，于36℃恒温振荡器中振荡8小时，得到单克隆细菌增殖培养的菌液，备用。将菌液稀释100倍置于9

3、6孔板中，四周为NB培养基作为空白。置于恒温培养箱中，于36℃培养24小时，取出。将菌液倾出，用蒸馏水反复清洗后，加入0.1%结晶紫染色30分钟后，将结晶紫倾出，洗净，加入1%脱氧胆酸钠溶液，30分钟后，测其600nm处的OD值。以菌液浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，考察BBF生长情况。1.2　影响大肠杆菌BBF生长的因素通过实验的反复摸索，我们发现影响大肠杆菌BBF生长的因素主要有以下几种：①菌种：不同的大肠杆菌菌株对BBF的影响很大，直接影响到BBF的生长与否和BBF形成的好坏。且大肠杆菌传代越多

4、，BBF的生长情况越不好，故我们每次实验均采用大肠杆菌的第二代菌株。②96孔板的材质：不同的细菌在不同材质的96孔板上的生长情况是不同的。我们选用了市场上常见的三种96孔板分别是进口聚氯乙烯（PVC）板，国产聚苯乙烯（PS）板，进口聚苯乙烯板，大肠杆菌分别在不同材质的96孔板上培养。结果，大肠杆菌在国产PS板上的生长情况是最好的。③3培养时间：考虑到实验操作时间的可行性，我们选定将大肠杆菌分别培养18小时、24小时、36小时，考察BBF的生长情况。结果，大肠杆菌在培养24小时后，BBF的生长情况最好。

5、1.3　金黄色葡萄球菌BBF的建立及影响因素金黄色葡萄球菌的BBF模型的建立方法基本上与大肠杆菌的相同。在这里就不做详细的介绍。我们仍旧分别考察了96孔板的材质、培养时间及菌液浓度等因素，最终确定金黄色葡萄球菌菌液稀释100倍、于国产PS板上培养24小时，BBF的生长的最好且稳定。3