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1、2010年辽宁林业科技2010第2期JournalofLiaoningForestryScience＆Technology№2七叶树RAPD反应体系的优化11,2*31王绍文，时明芝，张建国，曹兴（1.聊城大学农学院，山东聊城252059；2.山东财政学院，山东济南250014；3.济宁市林业局，山东济宁272019）2+摘要：以七叶树新鲜叶片为材料，研究了七叶树RAPD分析过程中的影响因素包括Taq酶、Mg、dNTP、引物、模板DNA浓度、变性时间、循环次数等，建立了适合七叶树RAPD反应的PCR体系。即2+20μl反应体系中含有d
2、NTP0.25mmol/L，Mg2.5mmol/L，Taq酶1.0U，引物0.8μmol/L，DNA模板50ng。扩增程序为：94℃预变性5min，然后40个循环（94℃变性30s，33℃退火40s，72℃延伸60s），最后72℃延伸10min，4℃保存。关键词：七叶树；RAPD；优化中图分类号：S793；Q943文献标识码：A文章编号：1001-1714（2010）02-0018-03OptimizationofRAPDreactionsystemsforAesculuschinensis11,2*31WANGShao-wen,SH
3、IMing-zhi,ZHANGJian-guo,CAOXing(1.CollegeofAgriculture,LiaochengUniversityofSandongProvince,Liaocheng252059，China;2.ShandongCollegeofFinanceandEconomics,Jinan250014，China;3.JiningCityForestryBureau,Jining272019，China)Abstracts：TakingfreshleavesofAesculuschinensisasmater
4、ials,suchfactorsimpactedonRAPDanalysisasTaqenzymes,Mg2+,dNTP,primer,concentrationofDNAtemplate,timeofdegenerationandcyclingwerestudied,andPCRsystemsfittedforRAPDreactionofAesculuschinensiswereestablished.Therewere0.25mmol/LofdNTP,2.5mmol/LofMg2+,1.0UofTaqenzymes,0.8μmol
5、/Lofprimerand50ngofDNAtemplatein20μlreactionsystems.Theamplificationprogramwasasfollows:pre-degeneration5minat94℃,andthencyclingfor40times(degeneration30sat94℃,annealing40sat33℃,extension60sat72℃),extension10minat72℃atlast.KeyWords：Aesculuschinensis;RAPD;optimization七叶树
6、(Aesculuschinensis)，别名梭椤树、七叶枫性差，可靠性降低，故试验前对影响PCR反应的各树，七叶树科七叶树属落叶乔木。干形通直，树姿因素进行系统比较研究，确定最佳反应条件，获得壮丽，枝叶扶疏，冠如华盖，叶大而美，为世界五大稳定的扩增结果显得尤为重要。[1]著名观赏树种之一。1试验材料与方法[2][3]RAPD是1990年由Williams、welsh等发表的1.1试验材料一种检测核苷酸序列多态性的新方法。这种方法试验于2008年6～10月在聊城大学生命科学以PCR为基础，且不必预先知道DNA序列的信学院分子实验室进行。
7、七叶树新鲜叶片采自济宁息。随后，随机扩增多态性DNA技术（randomly林业局种苗站苗圃。2+amplifiedpolymorphicDNA，RAPD）因其操作简便、试验所用试剂，包括随机引物、Taq酶、Mg、快速、省时、省力、DNA用量少，迅速受到人们的重Buffer、dNTP、Marker（DL2000）均为上海生工生物视，并广泛地被应用于农、林、医及植物和微生物学公司产品。琼脂糖（EEO为0.15，由基因科技(上海)[4]的各个领域中。PCR反应条件对RAPD的带型影有限公司分装）、石蜡油(Sigma分装)，其它试剂均为响很大
8、，不标准的PCR反应体系造成RAPD的重复国产分析纯试剂。收稿日期：2009-09-22基金项目：山东省教育厅科技攻关资助项目(J07YG08)。*通讯作者—18—第2期王绍文等：七叶树RAPD反应体系的优化2010年1
