幽门螺杆菌尿素酶C基因的克隆、表达及其在血清学诊断中的应用

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1、第四军医大学硕士学位论文幽门螺杆菌尿素酶C基因的克隆、表达及其在血清学诊断中的应用姓名：徐俊荣申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：张沥;闫小君2001.6.1英文缩写词AAmpBLASr英文缩写词表英文奎名adenosinampicilinBasicLocalAlighmcntSearchToolbovine$orwnalbuminbasepaircytidineDaltondotimmunogold：fillxationassaydeoxyribonucleicaciddeoxyribonucleaseIdeoxyribonucleosidetrisphosphatesEthid

2、umbromideEscherichiacoliethylenediamminetetetra-aceticAdd就比yme-li则immunosorbe殂tassayHeficobacterpyiodimmunoglobulinkqopropylthio-D-D-galactosidekilobasekilo-DaltonLuria-Bertanimediuml中文译名腺嘌呤棱苷氨苄青霉素基本的相似性检索工具牛血清白蛋白碱基对胞苷道尔顿斑点金免疫渗滤实验脱氧棱糖权酸DNA酶I脱氧棱糖糖苷三磷酸溴化乙锭大肠轩菌乙二胺四乙酸酶联免疫吸附实验幽门螺杆茼免疫球蛋白异丙基-口．】D-半乳苷千碱基千道尔

3、顿LB培养基姒岫cm一姒～一n一一一脚蜘啪硒砌n第四军医大学硬士学位论文MALTMucosa-associated胃粘膜相关lymphoidtissue性淋巴组织ODopfinaldens时光密度值ORFoponreadingfi'lⅡne开放读框PAGEpolyacrylamidegeldectrophoresis聚丙烯酰胺凝肢电泳PBSphosphate-bufferedssJine磷酸缓冲盐液PCRpolymer如echainrc,acfion聚合酶链反应RNa∞ribonuclease按糖核酸酶SDShine'DaldamosequenceSD序列SDS80dilJmdodecylsu

4、lfate十二烷基硫酸钠SPAstaphylococcalproteinA葡萄球茵蛋白ATthymidinc胸苷TsqThermosaquarius嗜熟茵TMB3,3’，5，5’-蛐cthylmnm-onium四甲基联苯胺chlorideTirstrishydroxymethylaminomethane三羟甲基氨基硅烷ureu坤a∞尿素酶X．gal5-btomo-4-chloro-3·indolyl一5-溴4氯-3-吲哚D．D-galactosidc．p-D-半乳糖苷2幽门螺杆菌尿素酶C基因的克隆、表达及其在血清学诊断中的应用硕士研究生导师辅导老师关键词：幽门螺杆茼、尿素酶C基因、太膊杆茸、免

5、疫球蛋白G、斑点金免疫渗滤实验摘要幽门螺杆茼(Hp)是一种在胃病惠者胃内发现的革兰阴性弯曲杆菌．Hp是怠慢性胃炎及胃十二指肠溃疡的致病因素．它与胃癌及胃粘膜相关性淋巴组织(MALT)淋巴瘸的关系也十分密切．Hp最为重要的特征是舍有极为丰富的尿素酶．此酶可以迅速将尿素分解为氨和二氧化碳，在}琐定植及引起胃粘膜损伤的过程中起重要作用．／目前发现Hp尿素酶基躅大小约为7．5Kb，共有9个阅读框(ORF)，分刺与u∽、ureD，urea、呻，uroI、meB、ⅢcF、ureG和ureH。其中ureA、ureB为尿素醇的两个结构基因，它们具有高度保守性，是PCR检测Hp感染常选择的目的基因．urea、u

6、reB具有免疫原性，已被应用于Hp疫苗的研究中．其余7个ORP为尿素酶的辅助基因。其中urel和ureH为却所特有．uroC基因相对保守，常被用于PCR检测Hp感染的靶基因．现在已开发出的三种DNA酶免疫鉴定法检测H》感染的试剂盒，也都是根据HpureC基因设计探针来检测H扫感染的，这说明HpurdC在诊断}Ip感染中的价值已得到认可．幽门螺杆茵(Hp)感染的诊断方法有多种，但主要分为侵入性和非侵入性两大类。前者包括细茸学检查技术和尿素酶试验，需要内镜取材；后者包3授授士教教博荣君沥产馊小锋徐同张韩第四罩医大学硬士学位敝I括呼气实验和血清学检壹，不需要内镜取材．其中血清学诊断最为简便，在Hp感

7、染的人群筛检和流行病学调查中有极为重要的意义。目前ELISA方法仍是最常用的检测Hp的血清学方法。此方法敏感性和特异性均较高，但需要特殊培训的技术人员及检测OD值的酶标仪，且费时太久，限制了这种方法的应用．DIFGA是基于肢体金标记技术的一种快速斑点免疫结合试验。该方法使用微孔滤膜为载体，科用其渗滤浓缩及毛细管作用使抗原抗体反应快速进行．与，ELISA相比，它具有快速、简便的优点。敏感性与特异性几