碱水解法提高黄芪药材中黄芪甲苷的工艺研究

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1、碱水解法提高黄芪药材中黄芪甲苷的工艺研究作者：张金红，周晶，宋慧琴，吴志丽【摘要】目的建立碱水解法提高黄芪药材中黄芪甲苷收率的最佳工艺。方法以黄芪甲苷的收率为考察指标，采用正交实验对黄芪甲苷的提取工艺进行优选。考察NaOH浓度、水解时间及料液比对黄芪甲苷收率的影响，采用高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定其含量。结果NaOH溶液的浓度对黄芪甲苷的收率起主要作用，最佳工艺条件为：NaOH溶液的浓度为0.100mol·L-1，室温静置水解2h，黄芪药材与碱溶液的料液配比为1∶12，黄芪甲苷的含量

2、约是未经碱水解组的16.4倍。结论碱水解法可显著提高黄芪药材中黄芪甲苷的含量。方法简便易行，实用价值高，为工业化生产提供了依据。【关键词】碱水解法;黄芪;黄芪甲苷;正交试验　黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge的干燥根。黄芪皂苷是黄芪的主要药效物质之一，黄芪皂苷大部分是以环黄芪皂醇为苷元的皂苷，黄芪甲苷(astragalosid

3、eⅣ9)为其主要成分[1]，常作为黄芪药材及其制剂的质量控制定量的指标。药理研究表明，黄芪甲苷具有强心护心、保护神经系统及内皮屏障功能、改善血液流变学、调节机体免疫功能、抗衰老、抗胃溃疡等功能，此外，还具有降血压、镇痛镇静、促进胰岛素分泌等作用[2]。黄芪甲苷虽然药理作用显著，但其在黄芪药材中的含量很低，提取分离较困难，使其应用受到极大的限制。本研究利用皂化反应原理，在NaOH作用下将环黄芪醇皂苷转化为黄芪甲苷，通过正交实验优选黄芪甲苷转化的最佳条件，提高黄芪甲苷的收率，为黄芪甲苷单体制剂的研制开发奠定研究

4、基础。　　1仪器与试药　　1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪，Alltech2000ES型蒸发光散射检测器，AT-330柱温箱(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)，XWK-3A空气泵(天津市华生分析仪器厂);SZ-93自动双重纯水蒸馏水器(上海强运科技有限公司);BP-211D电子分析天平(德国赛多利斯公司);KS-600D超声清洗机(宁波科生仪器厂);W2-100旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司);PHS-25型酸度计(杭州亚美电子仪器厂)。　　1.2试药黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号

5、为110781-200613);黄芪药材(购自天津市药材公司，批号为Y0805267，由天津医科大学生药学教研室周晔教授鉴定，符合《中国药典》2005年版Ⅰ9部要求);AB-8型大孔吸附树脂(南开大学树脂厂);乙腈(天津康科德科技有限公司，批号：080426)色谱纯，氢氧化钠为分析纯;流动相用水为重蒸水。2方法与结果　　2.1色谱条件及系统适用性实验色谱柱：DiamonsilC18(4.6mm×250mm，5μm);流动相：乙腈-水(34∶66);体积流量：1.0ml·min-1;柱温：35℃;漂移管温度：

6、105℃;载气流量：2.5L·min-1;压力：0.4MPa;进样量：10μl。此色谱条件下，黄芪甲苷色谱峰与样品中其他组分色谱峰可达基线分离，分离度大于1.5，理论塔板数以黄芪甲苷峰计不低于4000。　　2.2黄芪药材提取液的制备称取黄芪药材200g，置于圆底烧瓶中，各次加乙醇量分别为药材干重的10，8，8倍，90℃水浴回流提取3次，各次回流时间分别为2，1.5，1h。每次回流后趁热过滤，滤液合并浓缩后定容至500ml，备用。精确吸取上述提取液5ml，按设定的实验条件进行水解后，调节pH至中性，上AB-8

7、型大孔吸附树脂，流出液重复上样一次，用3BV蒸馏水洗脱树脂，再用4BV70﹪乙醇洗脱树脂，收集70﹪乙醇洗脱液，于旋转蒸发仪减压浓缩近干，用70﹪乙醇溶解并定容于10ml量瓶中，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得黄芪药材样品液。a.黄芪甲苷对照品;b.碱水解前样品;c.碱水解后样品;1.黄芪甲苷图1黄芪甲苷标准品及黄芪药材提取液碱水解前后的HPLC图9　　2.3方法学考察　　2.3.1线性关系的考察准确称取经减压真空干燥至恒重的黄芪甲苷对照品24.7mg，置于50ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，

8、摇匀，作为储备液。分别精密吸取黄芪甲苷对照品储备液0.25，0.5，1，2，4，6，8ml，置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，按照“2.1”项下色谱条件测定黄芪甲苷的峰面积，以黄芪甲苷进样量(μg)的自然对数值为横坐标(X)，以峰面积的自然对数值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，并计算回归方程，Y=1.3768X+12.829，r=0.9998。黄芪甲苷在0.2