跨膜型与分泌型TNFα在AICD中的作用

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1、华中科技大学硕士学位论文跨膜型与分泌型TNF-α在AICD中的作用姓名：王彬申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：李卓娅2003.4.1华中科技大学同济医学院顾_{学位论文跨膜型与分泌型TNF．Q在AICD中的作用摘要硕士研究生王彬指导老师李卓娅教授华中科技大学同济医学院免疫学系TNF—a是由激活的单核／巨噬细胞，淋巴细胞等分泌的具有多种生物学活性的细胞因子。在体内以两种形式存在：即17KD的分泌型TNF—d(secretedTN下一d．sTNF-o【)和26KD的跨膜型TNF。Ⅸ(membraneassociatedTNF一。【．mTNF一Ⅱ)，．者均有生物学活性。‘触熟T细

2、胞的AICD是机体清除免疫应答中过量的效应T细胞，凋节免疫反应，维持免疫稳念和建立外周免疫耐受的重要机制。目前，已证实FasL是介导T细胞AICD的重要但非唯一的死亡分子。TNF—u是否介导AICD尚无定论，岜研究仅限制于sTNF-也，关于mTNF．Ⅱ在AICD中的作用则未见报道。y本课题观察和比较mTNF一0【和sTNF．O【在成熟T细胞AICD中的作用，以期阐明TNF-a，特别是mTNF．旺在AICD的生物学作用特征及规律，为深入探讨AICD的作用机制提供实验依据。一、AICD实验模型的建立r外肿HA和1L．2活化T细胞10天后，用CD3单抗诱导、活化硼胞凋华中科技大学同济医

3、学院硕t学位论文亡，在荧光显微镜下可见大量凋亡细胞，FACS结果显示其凋亡率可达67％，提再AICD实验模型建立成功。少／’二、内源性两型TNF．131．对T细胞AICD的影响静止T细胞两型TNF．0【的表达极低，经PHA和IL．2活化后，mTNF．Ⅸ表达增加到44％，并分泌一定量的sTNF—o【(125pg／m1)，当T细胞再次被CD3单抗激活时，mTNF一Ⅸ表达增加为88％‘p<0．01)，sTNF—d则增加到1500pg／mlLp<001)。2．TN下抗体和TACE反义寡核苷酸可部分抑制AICD，抑制率分别为31％和26％，提示两型TNF-q参与AICD效应，可能=者可协同

4、FasL／Fas及其他分子使AICD发挥最大效应。，三、外源性两型TNF-Ⅸ对活化T细胞凋亡及相关基因的影响趾述结果提示TNF—a是AICD的效应分子，那么在缺乏T细胞二次激活的情况下，给予外源性两型TNF—q能否导致活化T细胞发生凋亡?1．用外源性两型TNF一Ⅱ作用一次活化的T细胞后，经FACS检测DNA含量及用较灵敏的蛋白免疫印迹检测caspase．3活性，结果各实验组既无凋亡峰，也无Caspase3底物PARP的酶解片断，提示外源性两型TNF．0【不能诱导活化T细胞凋亡。2．外源性两型TNF—a作用活化T细胞后，mn吓．Ⅸ可抑制活化T细胞SODDmRNA的表达(抑制率40％

5、)，sTNF—c【对其无影响。此外，活化T细胞SODDmRNA表达比静止T细胞上调了17％，提示T细胞一次活化后上调的凋亡抑制蛋白可使之抵抗TNF—a诱导的死亡信号转导。3．外源性两型TNF一Ⅸ对静止和活化T细胞FasLmRNA表达均无影响。但T细胞一次活化后FasLmRNA表达比静止T细胞增高2．4倍，但并不引起活化T细胞凋亡。提示T细胞缺乏二次活化信号，即便AICD的效应分fFasL表达增，，●一，华中科技大学同济医学院硕f一学位论文加．也不能启动死亡信号。以上结果提示两型TNF—e【是AICD的效应分子；但是缺乏T细胞的再次激活．无论给予AICD的效应分子即外源性两型TNF

6、．a，或是活化T细胞表达FasLmRNA增加，都不能引起活化T细胞发生凋亡。提示AICD中二次T细胞活化信号是AICD效应分子诱导死亡信号的前提；此外，活化T细胞上调SODDmRNA可能是其缺乏二次活化信号：状态下抵抗两型TNF—a诱导死亡信号的机制之关键词：跨膜型TNF一Ⅱ分泌型TNF—q成熟T细胞AICDFasLSODDt～。“”‘“华中科技大学同济医学院硕：t学位论文TheRoleofmTNF．aandsTNF．仅inAICDofMatureTLymphocytesAbstractTumornecrosisfactor(TNF一Ⅱ1chieflyproducedbyacti

7、vatedmonocytes／macrophagesandTlymphocytesisapleiotropiccytokinewithavarietyofbiologicalactivities．TherearetwoformsofTNF一伐inthebody，namedthe26KDtransmembraneform(membraneassociatedTNF—c【，mTNF—d)and17KDsolubleform(secretedTNF—a．sTNF一∞．bothofwhi