豚鼠实验性近视眼视网膜色素上皮细胞HGF表达变化及钙离子的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文豚鼠实验性近视眼视网膜色素上皮细胞HGF表达变化及钙离子的研究姓名：仝春梅申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：王超英20090301中文摘要对近视，眼轴延长了1．534-0．31mm，前后变化差异有显著意义(胙O．05)。2细胞培养及鉴定结果：豚鼠RPE细胞培养后2．3天开始有细胞贴壁生长，1周左右汇合，免疫细胞化学鉴定为RPE细胞。3免疫细胞化学研究结果：HGF在RPE细胞中的表达定位于细胞浆，细胞核无着色。LIM组前部和后极部表达多呈棕黄色，为卅；SC组前部和后极部表达多浅黄色，为+；LIM组和SC

2、组各组自身前部及后极部比较，无显著性差异(矿O．05)；LIM组RPE细胞前部和后极部的HGF的阳性表达率都明显高于SC组的前部和后极部，且有显著性差异(正O．05)。4逆转录．多聚酶链反应(RT-PCR)结果：LIM组与SC组RPE细胞HGFmRNA均有表达。LIM组与SC组各组自身前部及后极部HGFmRNA表达无显著性差异(p>O．05)；LIM组前部和后极部HGFmRNA表达明显高于SC组，且有显著性差异(胚0．05)。5激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测结果：LIM组与SC组RPE细胞均有钙荧光。LIM组前部及后极部钙离

3、子的浓度明显高于SC组，且有显著性差异(则．05)，而LIM组和SC组前部钙离子的浓度与后极部比较，差异无显著意义(矿O．05)。结论：凹透镜诱导可以引起明显的轴性近视；体外培养的豚鼠RPE细胞稳定表达HGF。LIM组RPE细胞中前部和后极部HGF及HGFmRNA的表达均明显高于SC组。说明透镜诱导豚鼠实验性近视眼RPE细胞中HGF无论在转录水中文摘要平还是在蛋白表达上都增高，HGF在实验性近视眼RPE细胞中的活性升高，HGF通过间接方式参与实验性近视眼的形成。LIM组与SC组RPE细胞均显示较强的Ca2+荧光；LIM组前部及后极

4、部RPE细胞胞浆内Ca2+荧光强度明显高于SC组。LIM组与SC组各自前部及后极部Ca2+荧光强度差别不大。表明透镜诱导豚鼠实验性近视眼球前部和后极部的RPE细胞中cE+浓度增高。Ca2+参与了豚鼠实验性近视眼的形成。关键词：近视；凹透镜诱导；视网膜色素上皮细胞；肝细胞生长因子；激光共聚焦显微镜；钙离子英文摘要ExpressionofHGFintheguineapig’SretinalpigmentepithelialcellsandtheCa2+studyinexperlmentalmVODla■●l■一-IABSTRACTob

5、jective：Todeterminetheexpressionofhepatocytegrowthfactor(HGF)andtostudythecalciumfactor(ca2+)changesinculturedguineapiganteriorandposteriorretinalpigmentepithelialcellsinlens-inducedmyopia．Someconclusionswerevaluableforrevealingthepathologicalmechanismofmyopia．’Method

6、s：10two·week—oldguineapigswerelens—inducedmonocularly,asphericallensesof一10．00Dwasweartounilateraleye，anothereyeineachanimalwasuntreatedasself-c．ontrol(SC)．Beforeandafterexperiment，refractionwasmeasuredusingretinoscopyandtheoculusuterqueaxisoculilengthdeterminedbyA—sc

7、anultrasonography．Theretinalpigmentepithelialcellsofeachgroupwereculturedandpassaged1generationinvitro，Theculturedceilsweredeterminedtobepigmentepithelialcellsusingimmunocyt．ochemistrymethod．ImmunocytochemistrywasusedtodetecttheexpressionofHGFintheretinalpigmentepithe

8、lialcellsandtostudybylightmicroscope．ReverseTranscription—PolymeraseChainReaction(RT-PCR)WasusedtodetecttheexpressionofHGFrn