神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

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1、华中科技大学同济医学院2003届硕士研究生学位论文神经干细胞移植治疗大鼠脊脸损伤的实验研究研究生谢宗平导师郑启新华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科430022摘要目的:从新生大鼠大脑皮质区分离、培养并鉴定神经干细胞，并探讨神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性。卜法:采用无血清培养和单””“隆技术，通”nestin间接免疫荧光”胞化学鉴定，建立神经干细胞体外培养体系，利用重物打击法建立NYU脊髓损伤大鼠模型，(BBB评分后随机分成实验组和对照组)1周后将BrdU标记的神经干细胞植入损伤的脊髓部位，移植后:①每周BBB评分一次，以观察脊髓功能恢复情况，对所得数据进行统计学分析;②

2、第2周、第5周取材，从损伤的大体形态观察对比实验组和对照组脊髓修复的情况;③通过免疫荧光染色法追踪植入细胞的存活及状态，并计数阳性细胞数。结果:从新生大鼠皮质区可分离出具有连续克隆能力的细胞群，表达神经巢蛋白，具有单细胞克隆能力。细胞移植5周后:①实验组脊髓功能恢复华中科技大学同济医学院2003届硕士研究生学位论文明显好于对照组，差异有显著意义:②实验组较对照组脊髓局部空洞明显减小甚至消失;③植入的神经干细胞在受损的脊髓内存活、并向移植中心头尾侧迁移最远达”‘·少结论:分离的细胞具有持续的自我更新能力和单细胞克隆能力，表达神经巢蛋白，是神经干细胞;应用异体神经干细胞移植治疗可显著促

3、进受损大鼠脊髓的修复，促进脊髓功能的恢复。关*im’申经干细胞/细胞培养、鉴气脊髓损伤、移气一曰一，一一一一国.一，一一一..一一_2_华中科技大学同济医学院2003届硕士研究生学位论文TransplantedneuralstemcellspromoterecoveryininjuredratspinalcordGraduatecandidate:MeZhong-PingTutor:ZhengQi-XinOrthopaedicDeptofUnionHospital,TongJiCollege,HuaZhongUnivesnsvityofScienceandTechenologyWu

4、han,430022AbstractObjective:①Toisolate,cultivateandidentifytheneuralstemcellsfromthecortexofnew-bornrats;②Tostudytheefectsofneuralstemcells'transplantationoninjuredratspinalcord.Methods:Atfirst,establishinganeuralstemcell'sculturelineinvitrobyusingtecheniquesoffree-serumcellcultivationandsingl

5、e-cellcloning,thecellswereidentifiedbyindirectimmunofluorescenceofnestintechnique;thenestablishingthe`NYUimpactmodel'usingtheweight-dropdevice,themodelswererandomlydividedintotwogroups(experimentandcontrol)byusingBBBLocomotorRatingScale,oneweekafterinjury,theexperimentalgroupwasreceivedBrdU-la

6、beledneuralstemcels'transplantationin阮centerofinjuredspinalcord,thecontrolgroupwithculturemediumwithoutcells.ThenobservingthediferenceinrecoveryininjuredspinalcordbetweentwogroupsbyBBB-一-----一--~--~一-.3-华中科技大学同济医学院2003届硕士研究生学位论文locomotorratingscaleandhistologicalanalysisResults:Whecellswhichha

7、vetheabilityofcontinuouscloningwerefromthecortex;thecellsexpressedNestinantigenandhavetheabilityofsingle-cellcloning.②Therecoveryof的uredspinalcordofgroupisobviouslybeterthancontrols;thesyrinxininjuredspinalcordoftransplantedgroupisverys