胆红素脑病神经细胞凋亡机制的实验研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文胆红素脑病神经细胞凋亡机制的实验研究姓名：田巧红申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：徐天鹤2003.5.10重庆医科大学硕十学位论文英文缩写A正Anne)(inVAPApaf-IBaxBcl-2CaspaseFCMHENhIDAPBSPCDPIPODPSSABCTUNEL符号说明英文全文apoptosis—inducingfactorapoptosisapoptoticproteaseactivatingfactor-1BclAssociateXProteinB—celllymphoma-2cyst

2、einylaspaxtatespecieproteaseflowcytometryHcznotoxylinandEosinStainingN-methyl-D-aspartatePhosphateBufferedSalineProgrammedCellDeathPropidiumIodideperoxidasephosphatidylserineStrept--Avidin--BiotinComplexterminaldeoxynucleotidyl11ansferasemediateddUTPnickendlabeling中

3、文名称凋亡诱导因子膜联蛋白V凋亡凋亡蛋白酶活化因子-1Bcl相关X蛋白B细胞淋巴瘤-2天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶流式细胞仪苏木素一伊红染色N一甲基-D一天冬氨酸磷酸盐缓冲的生理盐水程序性细胞死亡碘化丙啶过氧化物酶磷脂酰丝氨酸链霉亲和素一生物素一酶复合物脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法鬟庆鞋科夫学磷l=学梗论文服红素脑病神经细胞润亡机制的实验研究摘要目的：裙步探讨新生豚鼠经小脑延髓池注射艟红素溶液制作艟红素脑病动物模型方法的可行性，研究服红素脑病模型豚鼠海岛神经细胞凋亡及塔死现象、凋亡穗关爨毫Bcl．2及B

4、ax蛋自表达鳃魂态交纯，分掇神经细胞TUNEL阳性率与Bcl。2、Bax骚白表达阳性率及Bcl．2／Ba)【比值的相关性，以进一步阐明胆红素脑病的避丝垫照翅立机制。l树瓣与方法：凄垒5天内豹囊生骡蠢睡2灵，麓瓿fff)唆7缀，每缓6只，其巾‘l组为对照组，其余6组为模型组。向模型组豚鼠小脑延髓池内注射胆级素溶液(注射剂量为lOug]]fl红素／g制4【重)，以建立胆红索脑病动物攘黧，各鬟努掰子绘药震2、6、12、2毒、48、72小时瑟头鞭齄；对鬈缀经小脑延髓池注射生理盐水0．1ml，于注射后24小时断热取脑。应用Annexin

5、V-FITC／PI双标记法、H基：染色法、TUNEL法及免疫组织化学染色法检测糙级素脑病模黧豚鬣海马神经细胞翡凋亡及坏死瑰象、凋亡穗关礞白Bcl．2与Bax蛋白的表达及两糟比值的动态变化，分析神经细胞TUNEL阳性搴与Bcl．2、Bax蛋白表达麓性率及Bcl．2／Bax比值的稳关性。结果：(1)对照组豚鼠于麻醉苏醒后呼吸平稳，无异常神经行为活动；模型缀骡鬣訾密瑰不阉程废豹享枣经行为改变。(2)HE染色爱巍镜观察，发现对照组豚鼠海玛神经细胞形态结构基本正常；模型组豚鼠脑组织胆红索黄染，海马神经细胞体积变小，拨染色质浓缩、边集、碎

6、裘，基本符合纲蕤凋亡的澎态学改交；霹器圣霹熬缨箍貔胀，魏浆空纯鞠核溶解，有的细胞呈均匀一致的红色，形成“红色神经元”即坏死神经元。(3)应用AnnexinV．FITC／PI双标记法检测胆红索脑瘸模型豚鼠海2重庆藩秘夫学硬士学寝论文码神经细胞凋亡率及坏-死率，发现模型组豚鼠海马神经绷胞凋亡率于给药瑶6枣时明燕野熹，24小时左右达到高峰，以惹逐澈降低；模型缝联鬣海马神经细脆坏死率于给药后64,时明显升高，12～24d"时达到高峰，以后较快降低。应用TUN-EL法所检测凋亡率的动态变化趋势与AnneXinV．FITC／Pl驳裕记法基

7、本～致。(毒)运耀受疫缝织诧学染氛法检测疆缝素脑病模型豚鼠海马神经细胞Bcl．2匈Bax蛋白表达阳性率，发现神经细胞结论：新生豚鼠经小脑延髓池注射胆红索溶液制作腮红素脑病动物模型的方法舆有可行性。胆红素脑瘸模型豚鼠海马区存在神经细胞坏死帮凋亡现象；艟红素逶过弼亡相关鬣自Bcl．2鞠Bax蛋自的参与丽导致神经细胞凋亡，从而介导胆红素神经毒性的发生。预防胆纽索脑病的发生燕至关重要戆。一。。关键词：胆红素高籍，凋亡，Bcl．∥Ba磊x新生蒹鼠关键词：胆红素脑瘸，凋亡，．2，，新生豚鼠二重庆医拳}天学颟士学萤论文ANEXPEmh伍NT

8、ALS汀UDYoN豫E众P()PT(yflCMEa睦焱NlS泰莲0FNEUROC鬟TESINBILIRUBINENCEPHALOPATHYObjective：Toexplorethefeasibilityofanimalmodelofbilirubinencephalopat