双靶点干预对糖尿病大鼠视网膜VEGF和CTGF表达的影响

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1、学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：蓬勤日期：w，弓年j月砷日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密U，

2、在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密圈。(请在相对应的方框内打“4”)学位论文作者签名：：堑塑日期：w，；年；月砷日导师签辞：——日期：．M3年J月洱日(‰气天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的1．在糖尿病大鼠视网膜中，研究结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因表达随时间变化，及透射电镜下观测大鼠视网膜微血管超微结构的变化。2．探讨经玻璃体腔注射抗VEGF新药lucentis和CTGFstlI矾A后，CTGF和VEGFmRNA表达水平及

3、视网膜微血管超微结构的改变。方法1．将48只大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和正常对照组(CoN组)，在造模成功后8、10、12周取大鼠视网膜标本行逆转录实时定量PCR检测VEGF和CTGF的基因表达变化。同时在各时点取各组大鼠眼杯，经戊二醛固定，透射电子显微镜观察。2．根据实验1结果，在造模后10周，将DM大鼠随机分为lucentis单靶点干预组，CTGFshRNA单靶点干预组，lucentis和CTGFs11I矾A双靶点干预组，未干预组，以及正常对照组。干预1周后取各组大鼠的视网膜标本，行实时定量PCR检测VEGF和CTGF的基因表达及透射电镜观察。结果1．实验1：在第8周时DM组大鼠

4、视网膜CTGFmRNA水平较正常组显著增高(P=0．037)且一直持续到第12周(尸=0．032，P=0．039)，而VEGF的rnRNA水平在第10周较正常对照组开始升高，持续到12周，差异均有统计学意义(P=0．043，P=0．036)。2．实验1：CON组未见异常，DM组从第8周开始出现异常改变，表现为视网膜血管内皮细胞肿胀，向管腔突出，细胞核内异染色质凝集居边，细胞质内线粒体明显肿胀，粗面内质网呈池样扩张，毛细血管基底膜增厚。且随着病程延长，改变更加明显，可见到闭锁的毛细血管，以DMl2组最为显著。3．实验2：Lucentis单靶点干预组，VEGF基因表达较DM未干预组显著降低(

5、P=0．014)，而CTGF表达较DM未干预组则显著升高(P=0．048)；CTGFshRNA单靶点干预组，CTGFmRNA水平降至与正常对照组相似(P=0．825)，天津医科大学硕士学位论文而且VEGFmRNA表达也降低(P=0．026)；双靶点干预组，VEGF和CTGFmRNA较未干预组均明显下调(P<0．001，P=0．001)，与正常对照组无显著区别(P=0．292，P=0．287)。4．实验2：CON组视网膜毛细血管管腔平滑完整，内皮细胞扁平紧贴于连续的基膜上。DM未干预组视网膜毛细血管内皮细胞水肿，异染色质边集。毛细血管管腔狭窄。双靶点干预组毛细血管腔较完整，内皮细胞稍水肿，

6、周细胞清晰完整，超微结构接近于正常对照组。Lucentis和CTGFshRNA单靶点干预组仍可见视网膜毛细血管管腔狭窄，内皮细胞水肿，异染色质边集，’超微结构完整性明显低于双靶点干预组。结论在早期DM大鼠视网膜内，VEGF和CTGF的基因表达即开始升高，且CTGF升高较VEGF早。Lucentis单靶点干预虽然在大鼠视网膜中降低VEGF的表达，但也造成CTGFmRNA水平的反应性增高；Lucentis结合CTGFshRNA的双靶点干预能同时降低VEGF和CTGF基因在糖尿病大鼠视网膜中的表达，’且其视网膜微血管超微结构的改变明显优于单靶点干预。关键词：糖尿病视网膜病变纤维化新生血管血管内

7、皮生长因子结缔组织生长因子透射电镜Il天津医科大学硕士学位论文AbstractObjective1．TocharacterizethegeneexpressiontimecourseofCTGFandVEGFinSTZ—induceddiabeticretinaanddetectthechangesofmicrocirculationultrastructurebytransmissionelectronmicroscope(TEM