树突状细胞促进脐血来源CIKNK细胞抗肿瘤效应的实验研究

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1、中山大学博士学位论文树突状细胞促进脐血来源CIK/NK细胞抗肿瘤效应的实验研究姓名：黎阳申请学位级别：博士专业：儿科血液学指导教师：黄绍良2003.5.5博士论文一黎阳树突状细胞促进脐血来源CIK／NK细胞抗肿瘤效应的实验研究中文摘要树突状细胞促进脐血来源CIK／NK细胞抗肿瘤效应的实验研究博士研究生：黎阳博士生导师：黄绍良教授中山大学附属第二医院儿科中文摘要／f脐血移植(CBT)已成为人体造血干细胞移植(HSCT)领域关注的焦点之一。近＼10多年CBT的迅速发展，至今己完成近3000例，90％以上的CBT是小儿病例，大量的I临床资料显示，HSCT前的预处理并不能完全杀灭白血病细胞，移植

2、后体内仍存在微小残留病(MRD)，可成为移植后复发的根源，补救治疗效果较差。大量的临床观察显示HSCT后存在的移植物抗白血病(GVL)效应与GVHD相关，GVL对MRD的进一步清除与白血病复发的控制至关重要。国内外CBT临床经验表明，CBT后虽可有重度急性／馒性移植物抗宿主病(aGVHD／cGVHD)，但总的来说GVHD发生率及程度均比BMT低。由于脐血中免疫效应细胞功能不成熟和数量不足，以及大部分血液肿瘤细胞上缺乏有效的特异肿瘤抗原的呈递，加上allo—CBT后较allo—BMT造血恢复延迟、GVHD相对较弱，如何增强CBT后血液病肿瘤患儿的GVL效应，减少复发，以进一步提高白血病患儿

3、CBT后的无病生存率仍需深入探讨。临床资料显示供体淋巴细胞输注(DLI)后显效的GVL均伴有轻度或中度的aGVHD／cGVHD。DLI的主要副作用就是引起不同程度的GVHD、感染、继发性再障、甚至骨髓衰竭，其中以GVHD最常见，严重对可致死。多年来，人们一直在寻找合适的GVL效应细胞，以便设计诱导GVL效应而限制GVHD的理想过继免疫治疗方案。血液系统恶性肿瘤治疗中具GVL效应的细胞主要有细胞毒T细胞(CTL)、NK细胞、及细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞、自然杀伤样T(NKT)细胞等。目前在人类的研究中CIK细胞多指CD3+CD56+R)湘细胞，其主要通过非MHC限制性的穿孔素介导的细胞

4、毒机制在肿瘤发生、转移和监视中显示出重要的抗肿瘤和排斥肿瘤细胞的作用，为极具潜力的肿瘤免疫治疗效应细胞。博士论文一黎阳树突状细胞促进脐血来源CIK／NK细胞抗肿瘤效应的实验研究中文摘要已有的体内外实验均证实CIK细胞较NK、LAK细胞具有更强的抗肿瘤活性，对化疗例药的肿瘤细胞株亦有杀伤作用；人体内实验发现来自自体或异基因PB—MNCs的ClK细胞对血液肿瘤细胞均有杀伤活性，却对正常造血集落的生长没有影响。在经致死量照射的Ba]bc(H2“)小鼠行allo—BMT后同时输入1×108供体BM—CIK细胞不发生GVHD却可保留GVL效应，CIK细胞的这种作用与其分泌高水平的INF—v有关。N

5、K细胞除了作为重要的抗肿瘤的天然免疫细胞，在体内还通过CD56与肿瘤特异性CTL的前体细胞接触(提供第二信号)刺激其活化，是CTL介导的特异性细胞免疫的核心调节细胞；NK细胞的基因型和功能状态对BMT具有重要影响，宿主静止状态NK细胞可以介导自体或异基因的排斥反应，而在a儿o～BMT中，输注供体经IL一2活化的NK细胞能预防GVHD，促进HSCT后的植入和造血重建。目前多认为CIK／NK细胞通过非}4HC限制性依赖穿孔索的细胞毒机制杀伤靶细胞，可以补充杀灭已经逃避CTL杀伤的不表达或低表达宿主MHC的肿瘤细胞，活化的CIK／NK细胞输注可以介导CVL效应并避免GVHD的发生，而且NK细胞

6、的发育不依赖于胸腺，可以避免类似CTL经过宿主胸腺“再教育”后失去识别宿主肿瘤抗原能力的现象发生；如在HSCT后通过不同细胞因子组合扩增上述抗肿瘤免疫效应细胞回输治疗恶性血液病，将具有巨大的临床意义和应用前景。目前扩增来自外周血的CIK细胞后输注对auto—PBSCT和allo—BMT后血液肿瘤复发的治疗和预防疗效良好，且对正常造血组织的细胞毒性小和输注后的GVHD效应轻微，显示其极高的临床价值。但CIK／NK细胞在CBT后临床应用尚未有报道，其抗肿瘤效应和安全性如何，尚需进一步的实验研究证实。而cB只能单次采集的特点决定了无法像PBSCT和BMT那样在移植后方便地获取供体来源的CIK／

7、NK细胞，因此必需获得脐血来源的CIK／NK细胞，建立相关的培养体系才能解决上述问题。cB中的具有抗肿瘤活性的成熟免疫细胞数量不足。但新鲜cB中幼稚的NK细胞在外源性IL一2，IL一12因子的作用下，cB—NK杀伤性可明显增强。CB中LAK细胞毒活性也极易诱导，在同样异种抗原刺激下CB～LAK前体细胞(LAKp)数量较APB高，对ALL、AML和CML靶细胞的细胞毒性也较APB—LAK强。进一步的研究还发现CB中产生细胞毒效应的细胞