脐血源树突状细胞促进t细胞对 肿瘤细胞的杀伤效应论文

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1、脐血源树突状细胞促进T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应论文曲新栋曲政海，左建新，孙立荣【摘要】本研究探讨人脐血单个核细胞体外诱导分化的树突状细胞（DC）促进T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。利用淋巴细胞分离液密度梯度离心法获取脐血单个核细胞，经贴壁法获得脐血贴壁的单个核细胞，经粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF）、白介素4（IL4）体外诱导分化为脐血DC。用间接免疫荧光法检测DC，MTT法检测DC活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。试验组加DC,DC与肿瘤细胞的比例分别为20∶1、50∶1、100∶1，对照

2、组不加DC。结果表明：脐血单个核细胞经GMCSF、IL4诱导后，第15天在倒置显微镜下可见典型形态的DC。荧光显微镜下.freelHumanCordBloodonTCellsinKillingTumorCellsAbstractDendriticcells(DCs)derivedfrombonemarroorassociatedantigencaninduceanvigorousspecificantitumorresponseinclinic.Thepresentstudyedtoinvest

3、igatetheenhancingeffectofDCsderivedfromhumancordbloodonTcellsinkillingtumorcells.Humancordbloodmononuclearcellshumancordbloodbydensitygradientcentrifugationusinglymphocyteseparatingmedium,andcordbloodmononuclearcellsmunofluorescence.ThecapacityofDCstoini

4、tiateTcelldependentantitumorimmuneresponsesorcellsinexperimentalgroupsorphologicalfeaturesatdays15e,(43.12±5.83)%CD1a+cellsentalgroupscouldremarkablyinitiateTcelldependentantitumorimmuneresponsesancordbloodmononuclearcellscanserveasabettersourceofDC,

5、otethecapacitytoinitiateTcelldependentantitumorimmuneresponses.Keyononuclearcell；dendriticcell；tumorcell；immunefunctionJExpHematol2007;15(3):586-590树突状细胞（DC）具有强大的抗原呈递和处理功能，已成为恶性肿瘤免疫治疗关注的焦点。本研究旨在探讨人脐血单个核细胞在GMCSF、IL4等细胞因子作用下体外诱导分化的DC对人肿瘤细胞的杀伤效应及其机制，为恶性

6、肿瘤的免疫治疗提供新的理论依据。主要器材3111型CO2培养箱（美国FormaScientific公司产品）,24孔细胞培养板（美国Costar公司产品）,IX70型倒置显微镜（日本Olympus公司产品）,.freelpus公司产品）,SI1640培养液和胎牛血清购自Hyclone公司,Ficoll淋巴细胞分离液（相对密度1.077）购自中国医学科学院生物工程研究所,重组人白细胞介素4（rhIL4）购自美国Promega公司,重组人粒巨噬细胞集落刺激因子（rhGMCSF）购自哈尔滨医药集团生

7、物工程有限公司,鼠抗人CD1a单克隆抗体和FITC标记的兔抗鼠IgG均购自协和干细胞基因工程有限公司。标本采集脐血取自青岛大学医学院附属医院产科健康足月顺产新生儿。脐血单个核细胞（CBMNC）的制备［1］肝素钠抗凝的脐血5ml，加入5mlRPMI1640培养液等体积稀释。将稀释脐血以3∶1沿管壁缓慢加至淋巴细胞分离液上面。1500×g离心20分钟。离心后上层与中层交界处混浊的灰白色层即为单个核细胞层。用尖头滴管轻轻插入灰白色层，吸出该层的单个核细胞。将RPMI1640培养液加入Ep管中混匀单个核细胞悬液

8、，13300×g离心5分钟,弃去上清，重复洗涤2次。用RPMI1640培养液调整单个核细胞悬液浓度为1×107/ml，分成2份，其中1份用作于DC的诱导分化，另1份用作于T细胞的分离。DC的诱导分化取24孔培养板，每孔加入1×107单个核细胞，终体积为2ml。37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中孵育3小时。轻摇培养板，吸弃细胞悬液，洗去非黏附细胞，获得黏附细胞。加入含rhGMCSF终浓度为100ng/ml，rhIL4终浓度为100ng/