广西部分地区商业肉鸭群鸭疫里默氏杆菌病的研究

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1、广西大学硕士论文广西部分地区商业肉鸭群鸭疫里默氏杆菌病的研究摘要鸭疫里默氏杆菌(Riemerellaanatipestifer,RA)病是目前危害养鸭业最为严重的疾病之一，主要侵害1～7周龄雏鸭，呈急性或慢性败血症，其主要病理特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎。该病由于高死亡率、增重缓慢给养鸭业造成巨大的经济损失。RA血清型较多，各型之间缺乏交叉保护的作用；对于已感染RA的鸭群，经常用药极易产生耐药菌株。因此，在广西对该病进行全面的研究，对于该病的有效防制是十分必要的。课题对广西的南宁、容县、钦

2、州三个地区不同曰龄的29个商业肉鸭群共184羽有浆膜炎病变的病／死鸭进行RA的分离与鉴定。分离株在烛缸培育的巧克力培养基上长成圆形、稍突起、表面光滑、透明，直径O。5~2mm的菌落，而在麦康凯平板上不生长；革兰氏染色后镜检可见呈革兰氏阴性的短小杆菌，单个、成双或呈链状，瑞氏染色显示两极浓染；经生化反应的鉴定，结果有82个分离菌株的生化鉴定结果与RA参考菌株NN050021①的基本一致；分别应用血清2型和血清6型的RA参考菌株制备的阳性血清对分离菌株进行玻片凝集试验，结果82个分离菌株均与RA血清2

3、型的阳性血清呈阳性反应；应用聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，PCR)对分离株的42kD外膜蛋白基因进行扩增，结果所有分离菌株均能扩增到与RA参考株一样的一条809bp大小的特异片段，而鸭源的大肠杆菌和鸭源的多杀性巴氏杆菌均未能扩增到相应片段；随机选取24个RA分离株进行12种常用药物的敏感性试验，结果表明大多数分离株对头孢唑啉、头孢啦啶、头孢哌酮表现高度敏感，而对恩诺沙星、洛美沙星、环丙沙星、强力霉素、卡那霉素表现有抗药性；同时对RA阳性病料进行大肠杆菌(E．col

4、i)的分离，结果表明两者混合感染率为31．71％(26／82)；不同日龄的病／死鸭的分离情况表明，2-6周龄均分离到RA，其中以2周龄最高(分离率达65．85％)，而1周龄内和7周龄以上均分离不到RA；脑的RA分离率为93．90％(77／82)，大大高于肝分离率的53．66％(44／82)；取分离株NN050034(亘)通过腹腔注射、脚蹼注射、口服、滴鼻、同居感染共5种途径进行樱桃谷(CherryValley)肉鸭的感染试验，结果除滴鼻感染未能引起肉鸭发生临床疾病外，其他4广西大学硕士论文广西部分

5、地区商业肉鸭群鸭疫里默氏杆菌病的研究种感染途径均可引起肉鸭发病，发病率在20％-100％。其中，经腹腔注射感染导致的死亡率最高，达80％，而同居感染只见发病未见死亡。从10％-100％郜3发病鸭的脑和肝中回收到RA。通过采用含不同浓度(10％、15％、20％)小牛血清的肉汤培养、鸡胚尿囊腔接种、鸭胚尿囊腔接种三种方法，分别进行RA单独培养、不同菌量(菌落形成单位；colonyformunits，CFU)比例(2：1、4：1、6：1、8：1)的RA和E．coli混合培养的增菌试验。结果表明，在肉汤培

6、养试验中血清浓度越高RA增菌效果越好，相同血清含量下静置培养则比摇床培养的效果要好，培养48h比培养24h的要好，以2：1混合培养RA和E．coli的增菌效果最佳；在禽胚接种培养的试验中，鸭胚单独培养RA以及混合培养RA和E．coli的效果均比鸡胚的要好，不同比例的RA和E．coli混合培养中，以4：1接种的鸡胚和鸭胚的增菌效果最佳；禽胚接种培养的效果均优于肉汤培-k‘．乔。通过12日龄鸭胚尿囊腔和10日龄鸡胚尿囊腔的途径按4：1、l：l菌量同时接种RA和E．coli分离株的种子液，分别收集接种后

7、48h内死亡的鸭胚和鸡胚的尿囊液、尿囊膜和胚体并制成匀浆混合液，经福尔马林灭活后按常规方法与矿物油分别制备成了油包水的二联油乳剂灭活疫苗I和II，并进行了实验室免疫保护试验、田间免疫攻毒试验和田间小规模免疫应用效果的观察。结果收获的鸭胚匀浆混合液RA和E．coli的产量达3×10旧个CFU／ml和5X1010个CFU／ml，鸡胚匀浆混合液RA和E．coli的产量达1×1010个CFU／ml和2．5X1010个CFU／ml；制成的二联油乳剂灭活疫苗I每羽份(O．5m1)分别含RA和E．coli4X1

8、09个CFU和7X109个CFU，疫苗II每羽份(O．5m1)分别含RA和E．coli2X109个CFU和5×109个CFU。5组每组各12羽的樱桃谷肉鸭，5日龄时1、2、3、4组颈部皮下接种疫苗I(1羽份)，5组则接种生理盐水。20天后取1、2、3和5组分别用同源的RA(5X10萏个CFU)、E．coli(5×107个CFU)和相同茵量的RA和E．coli混合菌液进行腹腔内接种攻毒，结果各组的保护率分别为83．3％、83．3％、75％和1O％；4组12日龄时再用该二联苗1羽份进行