鸭疫里默氏杆菌pfs基因的功能研究

《鸭疫里默氏杆菌pfs基因的功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、密级:论文编号:中囯农业科学院学位论文鸭疫里默氏杆菌/^基因的功能研究FunctionofthepfsgeneinRiemerellaanatipestifer硕士研究生：范国博指导教师：韩先干副研宄员申请学位类别.•兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研宄所研究生院2015年6月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的

2、任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生签名：I只t馬时间：>丨夕年4月$H关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以米用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:时间：v丨$年Z月)曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目鸭疫里默氏杆菌基因的功能研究1论文作者范国博专业领域兽医研究方向不区分研究方向指导教师韩先干培养单位

3、(哥F究所、中心）~7^'a~~姓名职称单位专业盲评-1/评阅盲评盲评

4、答辩主席秦爱建教授扬州大学预防兽医学孙建和教授上海交通大学预防兽医学童光志研究员上海兽医研究所预防兽医学答丁铲研究员上海兽医研究所预防兽医学辩马志永研究员上海兽医研究所预防兽医学委李国新研究员上海兽医研究所预防兽医学员于海副研究员上海兽医研究所预防兽医学会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月26日，上海兽医研究所密级:论文编号:中国农业科学院学位论文鸭疫里默氏杆菌pfs基因的功能研究FunctionofthepfsgeneinRiemerellaanatipestifer硕士

5、研究生：范国博指导教师：韩先干副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年6月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationFunctionofthepfsgeneinRiemerellaanatipestiferM.S.Candidate:GuoboFanSupervisor：AssociateProf.XianganHanDegree：MasterofVeterinaryScienceSpecialty:VeterinaryMedicine

6、June2015摘要鸭疫里默氏杆菌病又称为鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerellaanatipestifer,RA）引起的一种急性或慢性败血性传染病，发病率可高达70%，是造成当前养鸭业经济损失的主要传染病之一。密度感应(QuorumSensing,QS)是细菌通过分泌自诱导信号分子(Autoinducer,AI)来监测细菌群体密度，并协调细菌生物功能的交流机制，目前已成为微生物学的研究热点。细菌中5’-甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(5’-Methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteinenucleosi

7、dase，Pfs)在细菌代谢方面具有重要作用，参与QS系统信号分子AI-2的合成，AI-2对细菌的生理功能具有重要的调控作用。目前关于RAPfs的功能尚未见相关报道,因此，我们开展如下研究：1.RApfs基因缺失株和回复株的构建及其生物学特性研究分别扩增pfs基因的上下游序列（约1kb），克隆至载体pDS132中，构建pfs缺失质粒，利用接合转导的方法成功构建了RApfs缺失株Th4Δpfs。将包含pfs基因及其启动子的ORF，克隆至大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭载体pCP29中，构建了回复质粒pCP29-pfs，转化至RA中，成功构建Th4Δpfs的pfs基因

8、回复株cTh4Δpfs。生物学特性研究表明，与野生株Th4相比，缺失株Th4Δpfs生长速度较慢、对14日龄雏鸭的致病性(LD50)无显著变化、对Vero细胞的黏附入侵能力显著增强(P<0.05)。回复株cTh4Δpfs的生物学特性能基本回复至野生株Th4的水平。2.RApfs参与AI-2合成的功能验证Pfs和LuxS催化底物SAH可产生细菌的信号分子AI-2。RA由于缺乏luxS基因，不能合成AI-2。为验证RApfs是否参与合成AI-2，分别构建了3种含禽致病性大肠杆菌(AvianPathogenicEscherichiacoli,APEC)luxS基因的

9、回复质粒pCP29-RApro-lux