酶解玉米蛋白提取ACE抑制肽的研究

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1、分类号浮却t。乏硕士学位论文题目：酶解玉米蛋白提取ACE抑制肽的研究密级英文并列题目：墅!!型!!竺翌尘!星兰堡!盟塑堕垒垦里!些!堡i塑型旦121i鱼望鱼!坐曼!!坐堕!!!竺!Y!堕!研究生：刘萍专业研究方向：食品生物技术食品科学导师：杨严俊教授指导小组成员学位授予日期答辩委员会主席：夏文水教授江南大学地址：无锡市二oo六年穴月中文摘要摘要血管紧张素转化酶(ACE)是存在于人体血管内皮细胞内的一种酶，它在血压调节方面起着重要的作用，当其受到抑制时血压就会降低。目前已有许多合成的AcE抑制剂药物，但是这类药物药效持续时间不长，停药后会有反弹，使血压升高：并且，这类

2、药物对肾功能有一定损害。因此，寻找食物来源的安全、有效、无毒副作用的新型降压药具有重要意义。玉米蛋白是玉米淀粉生产中提取淀粉后的主要副产物，大约含有60％的蛋白质，主要为玉米醇溶蛋白。玉米蛋白质中含有高比例的疏水性氨基酸和脯氨酸、谷氨酸等，很少含有赖氨酸等碱性氨基酸，这种独特的氨基酸组成使玉米蛋白水溶性差，营养价值不高，而这种不平衡的氨基酸组成使玉米蛋白质成为多种生理活性肽，尤其是ACE抑制肽的来源。本实验选择产量丰富，价格便宜的玉米蛋白粉为原料，进行了提取ACE抑制肽的研究。在原料的预处理中，分别进行了脱色、脱除淀粉、增溶研究。在脱色处理中，研究了五种有机溶剂对玉

3、米蛋白的脱色效果，选择了95％乙醇作为提取溶剂，在脱除淀粉的研究中，通过口一淀粉酶、糖化酶对玉米蛋白粉中的淀粉进行水解，抽滤分离，使蛋白含量由原来的61．54％上升到了85．72％，通过研究还原剂、pH、温度对玉米蛋白溶解性的影响，确定了在pHl0～12条件下加入0．10％Na2S03作为还原剂，90℃预热15min的增溶方法，使溶解度由原来的4．2％提高到30．96％。以经过预处理的玉米蛋白粉为原料，选用7种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解生产玉米蛋白AcE抑制肽，用cushmaIl紫外分光光度法测定水解液的AcE抑制活性。结果表明碱性蛋白酶水解液具有最大的AcE

4、抑制率，水解条件优化实验确定最佳水解条件为：底物浓度2．5％，加酶量48Au／l(g，pH8．O，温度55—60℃。通过研究水解液的AcE抑制活性与玉米蛋白水解度的关系得出，在水解度15．96％时所得水解液对ACE抑制作用最强，IC50为O．247m∥mL。采用截留相对分子质量为5000的膜将粗水解液经过超滤分离，收集流出液，水解物的Ic。降低了17．6％，达到了初步纯化的目的。将初步纯化的组分进一步通过Bio—radP一2凝胶分离，得到了Ic50为O．085mg／mL的组分，其Ic50是原水解液的Ic50的34．4％，抑制活性显著提高。将此组分经RP-HPLC分离

5、，得到洗脱时间10．020min的组分AcE抑制率最高。通过液质联用，氨基酸分析，证明该组分是单一组分，其氨基酸序列是Ala—Tyr，Ic50为22．69¨mol／L。保温实验前后，Ala—Tyr的IC50变化很小，认为Ala—Tyr是ACE抑带JI剂。关键词：血管紧张素转化酶AcE抑制肽玉米蛋白粉碱性蛋白酶水解V英文摘要AbstractACE(An2iotensin—I—ConvertingEnzyme)，isanenzymewhichexistintheendodermiscellofhumanbloodvessel．ItplaysanimportantroIe

6、intheadiustInentofbJoodpressure．Whenitisinhibited，thebloodpressLlrewiIldrop．TodavalotofsyntheticalACEinhibitorhavebeenmade，buttheirinhjbitoreff爸ctonACEarereversjbIe．So。theeffbctcannotlastforlongtimeanddm2withdrawlcancausetherebounceofb】oodpressure．What’smore，thesvntheticalmedicinecando

7、ha肌forrenalfunction．So，itismeanin2fultofjndanewkindofmedicinefromfoodresourceswhichissafe．eⅡ色ctualandinnoXious．CGMfComGlutenMeal)isthemainoutgrowthjntheproducingofcomstarch．Itcontainsabout60％protein，mainlyofzein．Therearehighproportionofhydrophobeaminoacidandpm，glu，but10wproportionofa