《凝集反应实验》PPT课件

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1、凝集反应抗原抗体反应的类型1．沉淀反应√2．凝集反应3．补体参与的反应4.中和反应5.免疫标记凝集反应是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后与相应抗体（或抗原）发生特异性结合，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。在免疫学技术中，凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应两大类。凝集反应的类型一、直接凝集反应(directagglutination)是指细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集。反应中的抗原称为凝集原，参与反应的抗体称为凝集素。将已知的可溶性抗原（或抗体）吸附

2、或耦联到与免疫无关的载体颗粒表面,形成致敏颗粒,再与相应抗体（或抗原）作用,在适宜的电解质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象，称之。载体不同可分：红细胞－间接血凝试验聚苯乙烯乳胶－间接乳胶凝集试验活性炭－间接炭凝集试验。二、间接凝集反应1、正向间接凝集反应用于检测标本中的抗体抗体载体微球可溶性抗原免疫微球免疫微球凝集本试验简便、快速、敏感性和特异性高、成本低。2、反向间接凝集反应用于检测标本中的抗原本法快速、敏感性和特异性高+凝集抗原载体颗粒抗体抗体致敏颗粒A、正向：诊断试剂为已知抗原致敏的载体颗粒及相应抗体，用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。3、间接凝集抑

3、制反应又称为胶乳凝集抑制试验抗体待测抗原免疫微球免疫微球不凝集结果：免疫微球不凝集为阳性(标本)第一种情况：抗体免疫微球免疫微球凝集标本中无抗原结果：免疫微球凝集为阴性第二种情况：3间接凝集抑制反应B、反向：诊断试剂为已知抗体致敏的载体颗粒及相应抗原，用于检测标本中是否存在与致敏抗体相同的抗体。间接凝集反应的应用间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。（一）抗原的检测人绒毛膜促性腺激素检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验。（一）抗体的检测梅毒抗体类风湿因子RF一、正向间接凝集试验梅

4、毒快速血浆反应素试验RapidPlasmaReagin（RPR）RPR试验感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染梅毒4周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出梅毒的免疫性（一）梅毒的免疫性（二）另一种具有抗体性质的物质叫反应素（reagin），是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在感染后5～7周产生。经正规治疗后可逐渐消失。梅毒感染的实验室诊断（一）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（二）梅毒螺旋体抗原血清试

5、验（三）梅毒确认试验非梅毒螺旋体血清试验这类试验的抗原分为心磷脂、卵磷脂和胆固醇的混悬液，用来检测抗心磷脂抗体。由于这些试验具有相同的标准化抗原，所以敏感性相似。可用作临床筛选，并可作半定量，用于疗效观察。非特异性类脂抗体测定1、性病研究实验室试验（VDRL）2、不加热血清反应素试验（USR）3、快速血浆反应素试验（RPR）4、甲苯胺红试验（TRUST）梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察的指标。1、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）2、梅毒螺旋体明胶凝

6、集试验（TPPA)3、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）特异性梅毒血清学试验梅毒确认试验（三）1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）2、梅毒螺旋体蛋白印迹试验（westernblottest）一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）[实验原理]梅毒患者血清中存在着能与VDRL(类脂质)抗原发生凝集反应的反应素，本试剂利用这一原理，将VDRL抗原吸附于活性炭颗粒表面，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的黑色凝块。一、梅毒快速血浆反应素试验（RPR）[用途]本方法能快速简单地测定梅毒病人血清中的反应素，可用于梅毒诊断和监测梅毒病人疗

7、效。试剂与器材RPR试剂梅毒阳性对照梅毒阴性对照纸片专用滴管，针头，橡皮头操作方法1.分别吸取30微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。2.另吸取30微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈中。3.用专用针头，滴管吸取RPR试剂，分别垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋转仪水平转动卡8分钟，100转/分钟然后3分钟内在光线充足处判断结果。结果判断1.阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。2.弱阳性反应（+——++）：可见较小的黑色凝集物。3.阳性反应（+++——++++）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。