微生物实验课件：凝集反应ELISA.ppt

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1、ELISA(酶联免疫吸附试验)凝集反应(ABO血型测定)ELISA(酶联免疫吸附试验)EnzymeLinkedImmunosorbentAssay原理：间接ELISA法颜色改变=待测标本中存在抗体洗涤洗涤1包被已知抗原2加入待检血清3加入酶标记的二抗(抗人IgG)4加入底物显色实验目的:检测血清标本中有无HBsAb材料:48孔ELISA板阳性对照血清（HBsAb）阴性对照血清酶标二抗洗涤液底物A和B微量加样器，待测血清标本等乙肝病毒表面抗体诊断试剂盒实验方法步骤：1、加入待检标本50ul；同时设阴性对照和阳性对照(分别各加1滴)go2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，37℃30

2、min3、弃去每孔液体,用洗涤液洗涤每孔，5秒×5次，拍干板4、每孔加显色液A、B各1滴,混匀,37℃10-15min5、肉眼观察颜色深浅（+：蓝色；-：无色）颜色变化或OD（吸光度）值酶标仪酶标板实验结果微孔板已包被HBsAgHBsAg加样+-123456每孔加50μl不同的血清样本Positivecontrol(HBsAb)：1滴Negativecontrol(NS):1滴加样+-sample加酶结合物每孔加酶结合物1滴混匀，37℃30min.enzyme加酶标二抗+-抗原抗体复合物游离洗涤+-加底物每孔加底物AandB各一滴混匀，37℃10min颜色变化或OD（吸光度）值

3、酶标板实验结果凝集反应原理:颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。应用：检测未知Ag或Ab分类：1.直接凝集反应：2.间接凝集反应玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定试管法---肥达反应ABO血型测定实验目的:检测待测者ABO血型材料:抗A和抗B血清,生理盐水,载玻片,采血针等.实验方法准备生理盐水管：5滴/管制备红细胞悬液:碘酒、酒精消毒无名指端,采血,1或2滴血液滴入生理盐水管中载玻片两端分别加抗A,抗B血清各1滴载玻片两端分别加红细胞悬液各1滴,混匀,10-15分钟内观察结果实验结果呈红色片状凝集颗粒为阳性思考ELSA实验中，待测标本是否含有

4、乙肝表面抗体？为什么？ABO血型鉴定实验中，待测者的血型属哪一型？