大葱再生体系建立及内源激素变化的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文大葱再生体系建立及内源激素变化的研究姓名：盛艳萍申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：杨建平;张松20040620关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行

2、检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：鱼垫浑导师签名：继毕日期：煎‘．2／山东农业大学硕士学位论文摘要本文建立了以成熟胚为外植体的大葱高效离体再生体系，并对其再生过程中内源激素含量的变化进行了分析，以期探讨内源激素的作用机制，并对大葱组织培养中外源激素的合理添加提供理论依据。主要结果如下：试验通过对大葱不同器官：幼叶、根、花蕾和成熟胚进行愈伤组织诱导，结果表明成熟胚为最佳外植体，诱导率高且稳定；花蕾次之，关键是掌握幼蕾的时期；幼叶和根较难诱导愈伤组织产生。大葱成熟胚在添加2,4．D

3、1．0-2．0mg．1以+6．BA2．0．4．0mg．1以的培养基上都可产生质量较好的愈伤组织，其中最佳诱导愈伤组织的激素组合为2．．．10+6一．．1～。愈伤组织继代培养初期以2，4．．,4D10mgBA20mgD10mg．14+6．BA2．0mg．10为好，2,4．D浓度过低或者代之以NAA都会导致愈伤组织过早的进入分化阶段，不利于增殖。继代培养后期应适时降低2,4．D浓度，以使愈伤组织能保持较好的分化性能。大葱愈伤组织分化的激素组合以NAA0．5mg．1d+6．BAl．0mg．1d为最好，分化率达81．67％。6-BA浓度升高虽然可以提高分化率

4、，达83．33％，但是极易导致严重的玻璃化。大葱愈伤组织分化产生不定芽后应及时转移到MSo培养基上，以逐步消除玻璃化现象，保证不定芽的正常生长。驯化移栽大葱再生苗的最佳基质为未灭菌的蛭石与草碳的混和基质(蛭石：草碳=1：1)，可能是其透气性和保水性比较适合大葱再生苗的生长。大葱成熟胚诱导30d的愈伤组织分别在2,4．D1,0mg．1‘1+6一BA2．0mg．1q和2．．．1d+6．．．1。1各继代，然后转移到．．1‘1,4DO5mgBA20mg30dNAA025mg+6．BAl．0mg．1。1培养基上或仅降低2,4．D浓度，可诱导胚状体的产生，前者的

5、发生率明显高予后者，说明2，4．D对于大葱胚状体的产生有抑制效应，而NAA则可能有促进作用。大葱的花蕾和愈伤组织都对抗生素Kan有很高的抗性，在Kan浓度高达200．0mg，l。1时也有一定的存活率，愈伤组织甚至还能蜘36．35％的增长率缓慢生长，这与许多其它单子叶植物类似；相对而言，大葱对抗生素G4l8则较为敏感，在G418浓度>130．0mg．1’1时就可被完全致死。因此，在以nptII作选择标记基因的大葱转基因工作中，G4ls较适合作筛选剂。大葱再生体系建立及内源激素变化的研究大葱成熟胚再生过程中内源激素含量的变化试验表明，生长素对大葱的离体再

6、生表现为阶段效应，在愈伤组织诱导的启动阶段含量很高，有积极作用；在不定芽分化的启动阶段含量降低，有负作用。脱落酸在愈伤组织诱导初期含量明显下降，中后期含量也很低，可能有负调控作用。赤霉素在分化过程的含量明显高于继代培养过程，可能对大葱愈伤组织的分化有促进作用。细胞分裂素在不定芽分化后期，即玻璃化发生期，含量急剧上升；在玻璃化芽转变为正常芽的过程中显著下降，因此推测可能是导致大葱不定芽玻璃化的主要因素。关键词：大葱；成熟胚；愈伤组织诱导；分化；玻璃化；内源激素4山东农业大学硕士学位论文StudiesonRegenerationSysteminVitro

7、andtheChangesofEndogenousHomaonesofWelshonion(Allium．fistulosumL．)AbstractAnefficientgenerationsysteminvitroofwelshonion口Ilium．fistulosum．L)wasestablishedinthisexperiment，usingthematureembryosasexplants，andtheendogenoushormoneschangesduringregenerationwasstudied．Thedifferentorg

8、ansofwelshonion--immatureleaves，roots，floralbudsandmat