萧山鸡白细胞介素2基因免疫的免疫增强作用研究

《萧山鸡白细胞介素2基因免疫的免疫增强作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、浙江大学硕士学位论文萧山鸡白细胞介素2基因免疫的免疫增强作用研究姓名：谢荣辉申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：于涟20030501辩滔走擘矮壹擎娃谂交接要建象嬲蕤奔素2是患絮漤爨爨怼产生豹一炎缨魏弱予，巍激涎T纲魁，捉谶B细胞分化殿分泌抗体，增强翠核细胞以及NK细胞的系伤活性，谯机体的楚疫爱袋孛萁畜鬟耍戆佟建，是～类天熬鼹囊痰增蓬裁。奉嚣纛嚣薅鑫缀魏套索2(IL．2)艨核袭越、真核表达及熟增强传染性法氏囊病黼海(IBDV)DNA疫苗兔痰羧栗逡嚣了磷究。将薷山鸡自绷胞贫溪2基困党隆入蹶梭表达载体pET-28b，获得了煎组表达簸钵pET-28b-[L-2，将忿重组表达质

2、鞭转佬大繇秆菡BL2t，缀Ip秘3诱罨表这璃{卜2。：嚣篷褒靛翡骜秘、PCR鉴定，SDS．熬G基驳及MTT蘧溪性检测试验迁实萧山璃IL．2程大肠秆黼中得列T正确、商效的表达。用萧山鸿IL-2所制备辩痧宠錾魏髂，遗嚣EL[SA寝Westernblotting试验褒饕囊交迭蕊蔫出鸡tL～2晏褰赵好的兔痰原性殿免疫厦戍性。穗繁出蔫交缀麓费囊2墓霹蹇篷天囊菝表达载薅pCI黪CMV痿臻予懿’F游，槐建真骇表达质糠pCI-IL-2。赢胍电击法将重缌膜粒转化入dam柳phoP基因双涎变酶减褥鬣伤黎涉订氐蓠zjl{l秣(zjijl，pCl～IL-2)，著奁接转染Veto露缎，提取魉照墓DKA

3、，DIG挺记糕针可梭测到靼挞杂交信号。霸FITC据记的羊抗魏IgG避行间接免疫荧光试验。可检测鼙U特异憔黼绿色菠光。SDS-PAGE籽Weste}§blot可整溅鬓18；5KD魏t4。5K9簿蛋塞象澄，蘩暴褒溪藏毒沙弱羲蘩zJltl髓将重组质粒pCI—IL一2携带进入Vero粼胞内表达具有纯疫反窳性的鸡IL-2。藏毒鬣嚣寨渗弱露熬7_3tit／pCt-IL-2辩瑟!ii／pcI藩探安全缝试验，舞票淡明：zJtlt／pCl”IL一2和z5111幽cI菌株只有柱10％fu黼剂量聃服后引越少数试验，j、鬣(笤15培l死亡，107era和l哦凫融稚麓羹缝瓣试簸夺露臻安全，姆zjt{l

4、，pCt—I卜2强i09赚i兹劐燮接糟14妇爨始器免疫鹪，未见{壬秘不良反应。也不影响鸡只的蹭重，脾脏、肝腻中的沙门氏菌：==次免痰后3嗣避被璃的免疫系统所清滁，粪餐孛魏汐f1戋蓥邀逐滚藏多；表醚穗援减凑羲囊寒渗羹氏麓ZJtt}蘩臻谗为载体傣递质糨DNA具谢良好的安全性。PCR撩定和酶切鉴定聪明zJllt／Dc卜lL吨萤拣在薅蠹多}鹭翼薅襄努酶豫定爨。将ZJlll／pCI—IL-2菌株分别以107cfu、】，08cfu、109cfu不问的剂蠼臼服与∞鼯gpCI—VP2h擎4／V鼯震狡赣台接释捶蠢龄游菲受菠建，2震嚣避稽=受，4新蕊大学硕士学位论定二凳螽l?天攻螯IB酬焱霉BC

5、6／85。凄甥玫毒器护试验缝爨表餮：zilli／薛{-IL-2菌株与pCI～VP2／VP4／VP3质粒联合免疫能照箸增强IBDV多聚蛋白DNA疫嫠对疆毒竣毒戆僳护。英串zjitl／pCI-IL一2菌攮108cfu、108cfu游麓量与200弘gpel～VP2／Vp4／VP3联合免疫组的仪护率均为8t％，zJltl／pCI-IL一2菌株107cfu与200pgpCI—VP2／vP4／VP3联合兔疫组静保护率(75％)，均离子20099pCI—VP2／VP4／VP3受疫豹保护率氆2．S努。裘嚼每只避曩服108cfuZJl!t／pCI-IL一2落是对IBDV多聚蛋白DNA疫苗发挥免

6、疫增强作闲的最德剂量。而鼠IBDV多聚鬣臼DNA痰萤诱导捩俸熬动悫盏线秘逢秘虢，薅麓彳港薹绍魏爱法茨囊8辩甚绥羹毽罐蓬爱成均得到了一致的结果。此外试验结果表明以减毒沙门氏黼zJrll菌株为敞体的薅{L一2基嚣免疫蹬强剂熊免疫壤疆魏巢甓显高于撩囊耱lL一2蒸澄受痰瑷强剂。本研究对萧由鸡fL一2萋因成功建运行了原接袭达及粪棱表达，翎备了多竟隧挞终。在国疼夕}善次磅铡了以城毒沙门涎莹为簸{搴豹蓑山鸡IL-2基因焚疫增强帮，所涮备的魏疫增强剂与IBDV多聚灏白DNA疫苗联合应用髂箍著撼商DNA菠蔷夔受痰效粟。戳藏毒沙门炙藩惫载髂铡鍪萧山璃IL-2基嚣鲐菠增强裁其有省时、方便、价廉、易

7、于群体免疫等优点，为研制低成本、实用化禽类DNA疫茁天然免疫躜疆裁瓣旋筷了～条蓊逡径。关键调：鸡；白细胞介素2：原核表达：真核袭达：蕊因免疫：传染憔法氏囊病病毒{减毒鬣伤寒沙fj氏菌；免疫增强裁浙江走擎硕士学锰论文AbstractInterleukin2(IL一2)isaIymphokineproducedbyactivatedTlymphocyteswhichexertsirmnunoregulatoryeffectsonavarietyofimmuneceltS，includingTtelIs，Bc