含狂犬病病毒SRV9株G基因的重组犬2型腺病毒的构建

《含狂犬病病毒SRV9株G基因的重组犬2型腺病毒的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、甘肃农业大学硕士论文中文摘要含狂犬病病毒SRV9株G基因的犬2型腺病毒重组病毒的构建研究生：田向阳导师：胡永浩摘要狂犬病(rabies)是由狂犬病毒(rabiesvirus)感染引起的一种自然疫源性人兽共患传染病。该病全世界广泛分布，一旦发生无法医治，且由于传染源广泛存在，控制和消灭该病难度很大。目前，进行疫苗接种是预防和控制狂犬病的有效途径。采用基因工程技术进行基因重组活疫苗的研究，是当前狂犬病免疫研究的热点。以病毒为载体的重组活载体疫苗能够很好地表达外源基因，其表达产物能诱导机体产生高水平的细胞免疫和

2、体液免疫。犬二型腺病毒是较为理想的病毒载体，其E3区为复制非必需区，E3区缺失或E3区插入外源DNA病毒仍能复制，因此E3区是构建复制型犬二型腺病毒载体的理想位点。插入E3区外源DNA大小与E3区缺失大小是能否获得重组病毒的关键因素。在前期成功克隆犬2型腺病毒(CAV-2)感染性全基因组的基础上，对犬2型腺病毒(CAV-2)感染性全基因组进行了改造，用EcoRI、X'baI、AscI和XbM对CAV2全基因组质粒pPolyII．CAV-2进行酶切改造得到了改造后的pPolyII．CAV-2-new质粒。然

3、后以E3重组质粒pVAX．E3为基础，通过DraⅢ和SspI双酶切，缺失犬2型腺病毒全基因组重组中25097bp～26141bp之间共1044bp的E3片段，按与编码链相同转录方向插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因、SV40polyA构成的总长2424bp的表达盒，获得了重组质粒pWⅨ．E3．CGS。然后用NruI和SalI对重组质粒pVAX．E3．CGS和腺病毒载体pPolyII．CAV2．new(34．7kb)进行双酶切，将CGS克隆到pPolyII-CAV2一new载体上。再用Asc

4、I和ClaI双酶切pPolyII—CAV2．CGS-new(34．7kb)，游离重组基因组CAV2．CGS(32．7kb)。CAV2．CGS基因在脂质体LipofectamineT”2000介导下转染MDCK细胞系，8d后重组病毒在MDCK细胞系上实现了病毒包装。Western印迹试验标明，重组病毒CAV2．CGS能够表达狂犬病毒糖蛋白。同时在连续传代40代后每隔5代提取重组病毒全基因组进行酶切鉴定，发现其酶切位点保持不变。在对昆明鼠和本动物进行免疫后。重组病毒能够诱导昆明鼠和本动物产生抗狂犬病毒SRV9

5、株特异性中和抗体。而且，本动物试验发现免疫途径不同产生的抗狂犬病毒SRV9株的特异性中和抗体滴度不同，经口服、点眼、滴鼻等途径免疫的动物产生的抗狂犬病病毒SRV9株特异性中和抗体滴度明显高于肌肉注射免疫所产生的抗体滴度，这为其用于狂犬病的预防奠定了基础。关键词：狂犬病病毒；糖蛋白；犬2型腺病毒：重组病毒；构建甘肃农业大学颡士学位论文英文摘要ConstructionofRecombinantCanineAdenovirustype2ContainingRabiesSRV9GGeneMasterCandida

6、te：tianxiangyangadvisor：huyonghaoSummaryRabiesisoneofthenaturalepidemiczoonosiscausedbyrabiesvirus．Rabiesextensivelydistributea／lovertheworld，andbecauseoftheepidemicsourceswidelyexisting，thereisnoavailablewaysandmeanstocureit．anditisverydi伍0ulttocontrolan

7、deliminateittoo．Tocontrolandeliminaterabies，themosteffectivewayistocarryoutvaccination．nleresearchofrabiesvaccinationfocusesonthegeneticengineeringrecombinantlivevaccinesatourtime．Therecombinantvaccinevectoredbyviruscallexpressforeignimmunogenswellandcaus

8、ehJ曲levelofcellandbodyimmunoreaction．Canineadenovirustype2isakindofsatisfiedvirusvector,CAV2E3regionisnotimportantforviruscopy,todeleteE3orinsertforeignDNAintoE3region，CAV-2stillcflncopyitself,SOitisthesuitablesitet