利用玉米转座子AcDs构建水稻插入群体

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1、中国农业大学硕士学位论文利用玉米转座子Ac/Ds构建水稻插入群体姓名：张国静申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：郭泽建20060601摘要将转座子标麓法应用于水稻，构建水稻插入群体，是进行水稻功能基冈组学研究的重要手段。本论文磅究_在玉米转庆予Ds麓基础主，翻增双元袭这载体擒建了一个带有质粒援救系统静Activator／Dissociation(简称Ac／Ds)激活转座子作为插入标签，通过农枣}菌转入水稻，经分子生物学方法检测+获得了分剐含Ac和Ds的单拷贝株系，进行了Ac和Ds的去雄杂交以扩大突变群体，为尧隧蓥蠢辨究拳稻基蠲缀打下了缀好静萋磕。获耨主要结栗翔。卜

2、．：构建了基于Ac帮Ds结椽静载体，翊予东籀插入群体的建立。其中Ds楚含霄激活标签、基因捕获器结构秘质粒拯救系统的载体，利用根癌农轩藕(Agrobacteriumtwnefaciens)介导的方法接载体转化粳稻品种中花17的胚性愈伤组织，获得了35个转Ac载体的独立株系，获得了8个转D8的独立株系。PCR检测结采寝鸹。含Ac和Ds豹转纂因秫系全部至粥性。Southern杂交获得了15个Ac单拷贝独立栋系，4吟-Ds单拷霓独立棣系。表明转座予Ac／Os确爨整合到农稻基毽组中并霹稳定遗传给予代，对单拷贝株系Ac／Ds进行了火田去雄杂交，以扩大突变群体。对分别转Ac和Ds的粳稻

3、品种秀水11的杂交后代进行了抗性筛选，获得了具有明鼹抗稻瘟病蔼反盛的掠系，为筛选抗病突变体提供了可能。兼键谲：承稻，Ac／Ds转座予，根癌农稀菌，基因酾阱，质粒瓤被AbstractTransposontaggingis∞importanttoolforthestudyoffunctionalgenomics．ByconstructingthebinaryvectorDsandtransformationmediatedbyAgrobacterium，anAc／Dstransposonsystemthatcouldbeusedforbothplamidrescueandac

4、tivationtaggingwasdeveloped．WeobtainedsinglecopyplantswithAeorDsbymoleculartechnologicalanalysis．Thefollowingresultsareobtained：AbinaryvectorcarryingthemaizetransposonDswithactivationtagging、ganetrapandplasmidltSCtlesystemwasconstructed．ThemaizetransposonAcwithT-DNAandDswithT-DNAweretrans

5、ferredintorice(Oryzasativasubsp．japonicacv．Zhonghua17)byAgrobacteriummediatedtransformationmethodtoconstructamutantlibraryinrice．Thi岬ve(onehanduredandseventy-fiveindividualplants)independenttransformedAclinesandEight(Thirty-fiveindividualplants)independenttransformedDslineswereobtained．Al

6、ltheplantsshowedpositiveresultbyPCRanalysis．TheresultoftheSouthernblotindicatedthatintegrationofAc／Dsintoricegenomecouldstabilizedtoinheritetogeneration．AndweobtainedfiReen(seventy-fiveplants)transgeniclinesofAcwithsinglecopyandfour(twentyplants)transgeniclinesofDswithsinglecopy．Thetransg

7、enicplantsofDs—insertedwithsinglecopywerecrossedwithcastrationthetransgenieplantsofsinglecopycarryingActransposasetoscale-upmutantlibraryinrice．ThehybridsplantsconsistingofbothAcandDsofOryzasativa．Lcv．XiushuillwerescreenedbyMagnaporthegrisea,weobtainedevidentresista