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1、生物技术通讯ZX@@XKM)L=)[@X6L[Z[]^_17F!$L1FS‘5D;#""QS"S文章编号!!""TP"""#U#""QV"SP"S"SP"W综述转座子插入位点的鉴定方法王瑞白，阚飙中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，北京!"##"$［摘要］转座子是基因组中的可移动成分，已经成为分子生物学研究中的一种有用的研究工具。转座子插入位点识别的难易决定着转座子应用的潜能。本文介绍曾应用过的几种转座子插入位点周围染色体序列的克隆测序方法及其优缺点。［关键词］转座子；旁侧序列；鉴定方法［中图分类号］%&’［文献标识
2、码］(!"#$%&’()#%*+",’+-%*#.#$+/#0#12#$3#456$7&$8%*#9-6$,:+,+$,!"#$%&’()*’+,"#-’*.)*+,-,.,/012)*0/3,-1.+4-+/5+/61*,2175*892/:/*,-1*;6<-*/+/6/*,/20124-+/5+/61*,2175*892/:/*,-1*;=/->-*?!"##"$;6<-*5［;<,%-63%］@25*+A1+1*+52/,
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4、现的生物体基因组上的可移动的该方法的操作步骤为，将转座子插入后形成的突变体的染遗传元件，在细菌和各类真核生物中存在。转座子的存在和在基色体或质粒4L(用限制性内切酶消化，凝胶电泳分离后，以转因组中的转移可以直接或间接地造成基因重排，在基因组中引座子上的片段为探针，进行M1.,
5、化大肠杆菌，转座子突变已被广泛应用于与生物体某种表型相关的基因的识并根据一定的基因标记筛选克隆有转座子插入位点的片段的菌别，成为一个非常有用的分子生物学的研究工具。株O!PQR。当转座子插入生物体的染色体后，插入部位的基因的功能限制性内切酶的选取是整个实验成败的关键。选取的内切通常会丧失，在同一个操纵子内的下游基因的表达也会因为极酶一般要符合S个条件。第一，在发生转座的转座子片段上没有性效应而受到抑制。相反，如果在转座子内含有组成性表达的启或仅有!个酶切位点，或者!个以上的酶切位点是分布在筛选动子，插入位点下游的基因会出
6、现组成性表达。这些都会使突变基因标记的一侧的，这样保证M1.,
7、将简化筛选过的潜能取决于转座子插入位点分离的难易程度。程。第三，酶切获取的目的片段的大小在克隆操作的范围内，如在转座子应用的过程中，建立发展了多种插入位点周围序使用AN6!’做克隆载体时，片段一般在!"HC以下。片段越大，列的克隆方法，其中大部分的设计是基于96K技术的。除直接测克隆的效率越低，同时也增加了测序工作的难度和实验耗费的序法外，基本都能用于转座子多个插入位点的鉴定，但各个方法时间。的特异性以及效率有差异。在插入失活基因的实验中，在插入位质粒拯救法是转座子应用于分子生物学研究后应用最广泛点的序列确定后，一般应进
8、行基因互补实验，以验证获得的基因的转座子插入位点周围序列鉴定的方法。涉及的分子生物学的与表型变化的一致性。操作都比较经典，得到的片段具有很高的真实性，非特异性低。但这种方法实验周期比较长，操作相对繁琐，为保留选择标记，!质粒拯救法有时适宜的限制性内切酶的选取非常困难。对于一个突变体中有多处转座子插入的研究以及需要鉴定
