小鼠腹膜纤维化相关的LncRNA的初步筛选及功能分析

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1、分类号：R5学校代码：10062密级：学号：2014701027博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：小鼠腹膜纤维化相关的LncRNA的初步筛选及功能分析TITLEThePreliminaryScreeningandFunctionAnalysisofLncRNARelatedwithMousePeritonealFibrosis一级学科：临床医学二级学科：内科学肾病论文作者:王玉浔导师：姜埃利天津医科大学研究生院二O一七年九月分类号：R5学校代码：10062密级：学号：201

2、4701027学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：小鼠腹膜纤维化相关的LncRNA的初步筛选及功能分析TITLEThePreliminaryScreeningandFunctionAnalysisofLncRNARelatedwithMousePeritonealFibrosis一级学科：临床医学二级学科：内科学肾病论文作者：王玉浔导师：姜埃利教授导师组成员：冯福民教授史国辉教授天津医科大学研究生院二O一七年九月天津医科大学博士学位

3、论文I天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：探讨在腹膜透析液诱导小鼠腹膜纤维化过程中，长链非编码RNA(lncRNA)表达谱的变化，以及差异表达的长链非编码RNA的初步功能研究。利用高通量的微阵列基因芯片技术，探索长链非编码RNA在腹膜透析液诱导的小鼠腹膜纤维化动物模型中的表达差异。筛选异常表达的lncRNA、mRNA，并建立异常表达的lncRNA表达谱。进行芯片结果的PCR验证。对差异表达的基因进行初步生物信息学研究。从基因组学层面上，解释腹膜透析所导致的腹膜纤维化的机理，为以后临床试验的开展奠定实

4、验基础。方法：选取6周龄C57/BL雄性小鼠，分为对照组、早期腹膜纤维化组（造模4周）、进展期腹膜纤维化组（造模6周），各组10只。模型组：每日腹腔注射含葡萄糖浓度为4.25%的腹膜透析液1次，注射剂量：1mL/10g体重。建立腹膜纤维化的早期及进展期小鼠模型。实验周期完成后，分别对各组小鼠的腹膜透析超滤量及流出液蛋白浓度进行检测；分别留取三组小鼠的眶静脉血、腹膜透析流出液进行送检，检测小鼠静脉血和腹膜透析流出液中尿素及葡萄糖浓度，计算两种物质的清除率；分别留取三组小鼠的壁层腹膜组织，行HE染色、Ma

5、sson染色，观察腹膜形态学的改变；留取小鼠的脏层腹膜组织，提取、纯化脏层腹膜组织的总RNA，合成cRNA，制备基因芯片，进行数据分析。将对照组及早期腹膜纤维化组、进展期腹膜纤维化组分别进行两组间比较，得出差异变化的lncRNA、mRNA的表达谱。选取差异表达上调及下调倍数较高，且符合筛选标准的数个IncRNAs进行实时定量聚合酶链式反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qRT-PCR)检测，对基因芯片结果进行验证。对差异表达的mRNAs进行G

6、O分析，获得参与腹膜纤维化过程中差异表达的mRNA的生物学信息，与具体基因联系起来，对其功能进行描述。查询检索KEGG数据库，从中获得差异表达的mRNAs参与的信号通路注释，进一步阐述这些基因的作用机制。结果：（1）与对照组相比，早期腹膜纤维化组及进展期腹膜纤维化组腹膜透析超流量均有所减少（P＜0.05），进展期腹膜纤维化组与早期腹膜纤维化组比较，腹膜透析超流量明显减少，有统计学差异（P＜0.05）。与对照组比较，两模型组腹膜透析流出液中引流蛋白浓度增加，有统计学差异（P＜0.05）；两模型组间比较，

7、腹膜透析流出液中引流蛋白浓度无显著差异（P＞0.05）。II天津医科大学博士学位论文（2）检验三组小鼠静脉血和腹膜透析流出液中尿素及葡萄糖浓度，计算两种物质的清除率。与对照组比较，早期腹膜纤维化组及进展期腹膜纤维化组的尿素、葡萄糖清除率下降，有统计学差异（P＜0.05）；两模型组间比较，进展期腹膜纤维化组尿素、葡萄糖清除率较早期腹膜纤维化组均有所下降，有统计学差异（P＜0.05）。（3）光镜下观察小鼠腹膜组织形态学特征，两模型组的腹膜结构均发生了改变，腹膜组织增厚，部分腹膜间皮细胞变形、间皮细胞间连接

8、消失、间皮细胞下纤维组织增生，间质间炎症细胞浸润，且随着腹膜纤维化发生的进展，上述改变逐渐显著。（4）高通量微阵列芯片技术检测结果显示，两组腹膜纤维化小鼠模型IncRNAs的表达量与正常对照组分别进行比较，差异表达2倍及以上。选取两模型组与正常组比较结果为同向性改变的lncRNAs及mRNAs。lncRNA筛选结果：与正常对照组的比较，早期模型组中差异表达的lncRNA有857个，其中表达上调的lncRNA有341个，表达下调的lncRNA有516个；进