酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究

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1、分类号：Q291单位代码：10183酶研究生学号：2015342016密级：公开促化学偶联构建胆固醇吉林大学-g-聚胺硕士学位论文酯载体(学术学位)介导p53酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究基因递ChemoenzymaticSynthesisofCholesterol-g-Poly(amine-co-ester)送的AmphiphilicCopolymerasaCarrierforp53Delivery研究作者姓名：陈嘉雯专业：生物化学与分子生物学陈研究方向：肿瘤纳米技术嘉雯指导教师：李全顺教授吉培养单位：吉林大学生命科学

2、学院林大学2018年3月—————————————————————酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究—————————————————————ChemoenzymaticSynthesisofCholesterol-g-Poly(amine-co-ester)AmphiphilicCopolymerasaCarrierforp53Delivery作者姓名：陈嘉雯专业名称：生物化学与分子生物学指导教师：李全顺教授学位类别：理学硕士答辩日期：2018年5月29日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任

3、何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用(但纯学术性使用不在此限)。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士(或硕士)学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2018年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据

4、库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊(光盘版)电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。论文级别：■硕士□博士学科专业：生物化学与分子生物学论文题目：酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林省长春市吉林大学前卫南区（130012）

5、作者联系电话：18704490290摘要酶促化学偶联构建胆固醇-g-聚胺酯载体介导p53基因递送的研究在世界范围内，各国的肿瘤发病率和死亡率都呈现逐年上升的趋势，使之成为威胁人类健康和亟待解决的恶性疾病。近年来，在肿瘤疾病的研究中，利用基因载体来递送特殊基因并促进所需治疗性蛋白质表达的方法，成为人们关注的焦点，有望为未来肿瘤治疗提供新的安全有效的技术手段。基于上述考虑，在本论文中首先将N-甲基二乙醇胺，癸二酸二乙酯和ω-十五内酯通过脂肪酶催化聚合成阳离子聚胺酯，然后利用季铵化反应将疏水性N-（2-溴乙基）氨基甲酰基胆固醇接枝到其主链上，制备出新型两亲共

6、聚物Chol-g-PMSC-PPDL。该载体材料能够与DNA进行良好的组装，形成稳定的纳米复合物，同时由于疏水性片段的引入，该载体表现出利于细胞摄取的特性并且有效地促进p53质粒的转染。我们以宫颈癌HeLa细胞（p53野生型）、人前列腺癌PC-3细胞（p53缺失型）为细胞模型，系统评价该载体介导p53基因递送、诱导肿瘤细胞增殖、迁移及浸润的效果与分子机制。递送48小时后，由于p53蛋白的大量表达，两种细胞系均产生明显的增殖抑制现象。同时，该纳米载体复合物（Chol-g-PMSC-PPDL/p53）能够通过外源基因的表达，增强HeLa细胞和PC-3细胞的

7、凋亡和周期阻滞效果。此外，载体介导的p53递送还可以抑制肿瘤细胞的迁移和浸润过程，有效地阻止癌细胞扩散与转移。最后，分子机制研究表明，Chol-g-PMSC-PPDL介导p53转染后，pro-caspase3、pro-caspase9蛋白表达含量下降，表明该体系通过Caspase-3和Caspase-9的激活介导肿瘤细胞凋亡。同时，由于线粒体膜电位下降，证明载体介导p53递送能够激活线粒体凋亡途径，进而实现对肿瘤细胞增殖的有效抑制。综上，通过酶促化学偶联合成胆固醇接枝的聚胺酯两亲性共聚物作为新型载体能够成功地实现基因的递送，通过目的基因在胞内表达产生大

8、量的治疗性蛋白质，极大地增强了对恶性肿瘤细胞的抑制和杀伤能力，以此来提高治疗效果。总体而言，这