内质网应激在脂肪基质细胞诱导分化为星形胶质细胞过程中的作用

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1、中图分类号：R741论文编号：2018327003UDC：密级：公开硕士学位论文内质网应激在脂肪基质细胞诱导分化为星形胶质细胞过程中的作用作者姓名：张利平学科名称：神经病学研究方向：神经再生与细胞凋亡学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2018年4月9日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：元小冬教授单位：华北理工大学附属开滦总医院论文评阅人：刘斌教授单位：华北理工大学附属医院邓红亮副教授单位：华北理工大学附属开滦总医院论文答辩日期：2018年5月16日答辩委员会主席：徐应军教授关键词：脂肪基质细胞；内质网

2、应激；星形胶质细胞；细胞凋亡唐山华北理工大学2018年6月TheRoleofEndoplasmicReticulumStressDuringAdipose-derivedStromalCellsInducedintoAstrocytesDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyZ

3、hangLiping(Neurology)Supervisor:ProfessorYuanXiaodongJune,2018独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工

4、大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要目的分析脂肪基质细胞（Adipose-derivedstromalcells,ADSC）诱导分化为星形胶质细胞过程中内质网应激（Endoplasmicreticulum

5、stress,ERS）的特征，从而明确ERS在这种诱导分化反应中的作用。方法1将ADSC从成人离体脂肪组织中提取后，进行传代与培养，选取生长状态良好的第3代ADSC，用DE-1诱导剂对其进行诱导分化，获得未诱导组及诱导48h、7d、14d、21d组细胞。倒置相差显微镜观察不同诱导时间组细胞的形态变化，并摄片存档。2免疫细胞化学技术检测ADSC未诱导组及各时间诱导组胶质纤维酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)、双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PKR-likeERkinas

6、e,PERK）、活化转录因子6（Activatingtranscriptionfactor6,ATF6）、葡萄糖调节蛋白（Glucose-regulatedprotein,GRP78/BiP）、和细胞凋亡蛋白增强子结合蛋白同源蛋白（Enhancer-bindingprotein-homologousproein,CHOP/GADDl53）、半胱天冬氨酸蛋白酶12（Cystemeaspartatespecificprotease12,Caspase12）和半胱天冬氨酸蛋白酶3（Cystemeaspartatespec

7、ificprotease3,Caspase3）的表达情况。3Western-blotting法定量检测ADSC在未诱导组及各时间诱导组中GFAP、PERK、ATF6、GRP78、CHOP、Caspase12和Caspase3的表达水平。4免疫荧光化学法检测ADSC向星形胶质细胞诱导过程中GFAP与PERK、ATF6、GRP78、CHOP、Caspase12和Caspase3的共表达特征。5统计学分析：将全部实验数据应用Excel2007建立数据库，应用SPSS17.0统计学软件对全部数据进行分析，计量资料以均数±标

8、准差（x±s）表示，各组不同时间点间的比较采用单因素方差分析（onewayANOVA），各诱导水平之间的多重比较（两两比较）用LSD进行检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果1原代ADSC培养24h呈类圆形、锥形或短棒状，均匀贴壁生长；第3代第5天的ADSC呈长梭形，纤维细胞状，两端长突起纤细变长；ADSC诱导48h时形态不规则，两端长突起回缩，胞体