细胞生物学大实验实验指导

《细胞生物学大实验实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/细细胞胞生生物物学学大大实实验验实实验验指指导导生生物物秀秀搜搜集集整整理版版权权归归原原作作者仅仅供供学学习习参参考不不得得用用于于商商业wwww..bbiooo.coom生物秀论坛www.bbioo.com/bbs/实验一DNA显示和细胞有丝分裂相的观察核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA 主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有

2、少量的 RNA，核仁中也有少量的 DNA。在线粒体，叶绿体等细胞器内除含有 RNA外，也含有少量的 DNA。一、目的与要求了解Feulgen 反应的基本原理，学习其操作方法和压片法，初步掌握细胞分裂各期的主要特点。二、原理Feulgen反应的原理是根据 DNA经弱酸（1mol/L）水解后，打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合，形成含醌基（）的化合物，醛基是一个发色团所以具有颜色，因此凡有 DNA的部位，就呈现紫红色。三、实验内容1．DNA的显示法Feulgen反应2．压片法3．细胞有丝分裂相的观察四、实验步骤（一）DNA的显示

3、法Feulgen反应以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下:中国生物科学论坛【生物秀论坛】1 http://www.bbioo.com/bbs/生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/切取根尖↓ 长度 0.30.5cmCamoy 固定剂↓ 固定 1030分钟95%酒精↓ 10分钟70%酒精↓ 10分钟蒸馏水→(对照)5%三氯醋酸o↓ ↓90 C 15分钟1mol/L HCl ← 蒸馏水↓ 室温1mol/L HCl o↓ 60 C 8 分钟Schiff试剂↓ 40 60分钟亚硫酸水(1,2,3)↓ 换3次,每

4、次5分钟自来水↓ 将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料蒸馏水↓ 压片↓ 镜检(二)压片法压片的操作步骤如下,把根尖放在载片上,用刀片切取根尖(0.3cm),纵切根尖,加一滴水,用解剖针将根尖纵向分成若干小条,保留12小条,加盖玻片,用铅笔端轻轻敲击盖玻片,使细胞分离、压平呈云雾状。（三）蚕豆（或洋葱）根尖压片的观察首先在低倍镜下，区分根尖的分生组织区及延长组织区的细胞，然后，在高倍镜下，观察细胞核的形态，注意在你的片子上，是否有有丝分裂细胞，如有，你能找到细胞分裂期的几个阶段，其特征如何？（可参照附录）（四）做Feulgen反应时，应注意的几个问题中国生物科学论坛【生物秀论坛】2 

5、http://www.bbioo.com/bbs/生物秀实验频道——努力做您的实验助手！http://www.bbioo.com/bio101/（1）固定剂的选择：一般常选用Carnoy固定液。其他的固定剂如 Flemming固定剂及 Champy 固定剂等均可用，但不能使用 Bouin固定剂。（2）水解时间：水解时间一定要合适，不宜过长或不足，否则会影响实验结果。如用 Carnoy 固定液固定的材料，水解时间一般在8－15 分钟之间。水解时间的长短要随不同的材料及不同的固定剂而定。（3）Schiff试剂的质量：在做Feulgen反应时，一个重要的成功因素就是Schiff试剂的质量问题。实

6、验时，要注意试剂颜色是否正常、有无SO2的气味。（4）洗涤剂的重要性：漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前临时配制，以便保持较浓的SO2。（5）实验对照组：一定要做对照片，以便说明实验结果的真实性。（6）操作过程中，用镊子镊取根尖的生长区部位，切勿夹取根冠部位。鸦片过程中尽量使根尖分生组织细胞保持原来的分布状态。五、习题1．简述Feulgen反应的原理2．欲得到一张好的Feulgen反应制片，制片过程中应注意些什么？3．绘制细胞分裂图。附录：植物细胞分裂的几个时期。细胞周期分为间期及分裂期，分裂期又称有丝分裂期。按照有无核膜，核仁、染色体，以及染色体形态与分布位置的变化，把细胞有丝分裂

7、又分为前期、中期、后期和末期四个阶段。现将各期特点简述如下，（1）前期：此期明显得变化是染色质螺旋盘绕成一定数目的细而长的染色丝，此即为染色体。染色体先是分散于核液中，以后，逐渐向核膜移动，在此时，核仁逐渐消失，核膜溶解。（2）中期：中期明显得特征是染色体进一步盘绕。变短变粗，在细胞的中央规则地排列成行，此即赤道板，若仔细观察，可以看到染色体两侧的纺锤丝。（3）后期：此期明显得特征是相同的两组染色体分别向细胞两极移动，染