细胞生物学实验指导71357

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1、《细胞生物学实验》生命科学学院生物技术系实验一：特殊显微镜的原理及其使用4实验二：电子显微镜的原理及使用8实验三：细胞膜的渗透性18实验四：细胞的凝集反应20实验五：诱导细胞融合一聚乙二醇法23实验六：线粒体和液泡系的超活染色26实验七：叶绿体和细胞核的荧光观察29实验八：细胞骨架的观察31实验九：细胞屮DNA、RNA的显示33实验一特殊显微镜的原理及其使用I.暗视野显微镜的原理和使用一、实验目的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基木原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基木步骤。二、原理和结构特点在口常生活屮，室内飞扬的微粒灰尘是不易

2、被看见的，但在暗的房间屮若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。暗视野显微镜就是利用此原理设计的。它的结构特点主要是使川屮央遮光板或暗视野聚光器，常川的是抛物面聚光器,使光源的中央光束被阻挡.不能由下而上地通过标木进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。在暗视野屮所观察到的是被检物体的衍射光图像.并非物体的木身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时，并大于1/2波长,则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体

3、的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004nm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜（最大的分辨力为0.2uin）所不具有的特性，可川以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。三、仪器、材料与试剂（-）仪器具有暗视野聚光器的显微镜（-）材料牙垢微生物，洋葱内衣皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头银子，滤纸条，指甲油,擦镜纸等。（三）试剂生理盐水四、实验步骤1•样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用铁子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，川滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲

4、油封片（或不封片）。2.将暗视野聚光器安装在显微镜上，调强照明光。2.将标木置于载物台上，插入10x物镜，用调焦螺旋聚焦样品。3.调节暗视野聚光器位管：这一步是调节暗视野像的关键，包括调节暗视野聚光器的高低位置和中间位置。可反复、缓慢地由低到高或市高到低调节暗视野聚光器的高低位置，聚光器偏高或偏低都将在视野中出现质量不好的影像，只有在合适的位置时，才可出现背景暗、影像亮的暗视野效果；调好聚光器的高低位置后，再通过聚光器上的调屮螺旋调节聚光器的中心位置，使得到最好的喑视野像效果。4.换川高倍物镜观察时，要换川高倍物镜相匹配的暗视野聚光器，依据上述步骤进行调节。五.作业

5、1.绘制暗视野内才垢微生物、洋葱内表皮细胞图（3-5个细胞）2.明视野和暗视野像的主要区别是什么？暗视野显微镜的特殊组件是什么？II•相差显微镜的原理和使用-X实验目的1.了解相差显微镜观察活细胞的基木原理；2.了解相差显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节相差显微镜的基木步骤。二、原理和结构特点光波有振幅（亮度）、波t（颜色）及相位（指在某一时间上光的波动所能达到的位置）的不同。当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们的眼睛才能观察到，这就是普通显微镜下能够观察到染色标本的道理。而活细胞和未经染色的牛物标本，因细胞各部微细结构的折射率利厚度略有不同，光波通过时，波

6、长和振幅并不发生变化，仅相位有变化（相应发生的差异即相差），而这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难以观察到。相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉现象，把相差变成振幅差（明暗差），同时它述吸收部分直射光线，以增大其明暗的反差。因此对用以观察活细胞或未染色标本。相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是：川坏状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜（通常标有PH的标记）代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。环状光阑是由大小不同的环状孔形成的光阑，它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。其作用是将直射光所形成的像从一些衍射旁像中分出來

7、。相板安装在物镜的后焦而处，相板装有吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。它除能推迟直射光线或衍射光的相位以外，还有吸收光使亮度发生变化的作川。调轴望远镜是用來述行合铀调节的。相差显微镜在使用时,聚光锐下面环f状光阑的中心与物镜光轴要完全在一直线上，必需调节光阑的亮环和相板的坏状圈亜合对齐，才能发挥相差显微镜的效能。否则宜射光或衍射光的光路紊乱，应被吸收的光不能吸收，该推迟相位的光波不能推迟，就失去了相差显微镜的作用。三、仪器、材料与试剂（-）仪器相差显微镜（二）材料口腔上皮细胞，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头蹑子，滤纸条，指甲油,擦镜纸等。（三）试剂