水曲柳体细胞胚胎发生的同步化调控

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1、摘要充分利用植物体细胞胚的前提是要有一个高频同步的体细胞胚发生体系，这也是自动控制其进程和研究其生理生化特性和分子生物学等问题所必须的。本研究利用未成熟的水曲柳合子胚为外植体诱导体细胞胚发生，探讨了渗透压、冷冻和ABA等处理对子叶形体细胞胚同步化发生的影响，及干燥和冷冻处理对体细胞胚萌发、体胚苗生根及后期生长的影响．通过研究得出如下主要结论：手工选择法、过筛法、饥饿法和后期液体培养法均不适合于水曲柳体细胞胚同步化的调控。渗透压调节法、冷冻法和ABA调节法均可提高水曲柳子叶形胚的同步化率．其中利用蔗糖来调节培养基的渗透压的方法所得到的子叶胚同步化率最高，然而在体细胞胚发育过程中存在明显的败育现

2、象，其中以前期诱导培养15d，蔗糖浓度降为50g．L_‘时水曲柳体细胞胚的同步化率最高为81．0％。ABA调节法中体细胞胚同步化率略低于渗透压调节法，且无明显的败育现象，但畸形胚发生率明显升高，在此方法中以前期诱导30d，ABA浓度为1mg'L"1的处理最适合于水曲柳体细胞胚的同步化调控．冷冻处理后子叶胚的质量好，且大小均一，但其同步化率明显低于其他两种处理，其中前期诱导15d、在低温条件下冷冻7d的处理最有利于水曲柳体细胞胚的同步化。从研究结果中可以看出，仅靠单一因素来调节体细胞胚的发育，很难获得高质量、同步化的水曲柳体细胞胚，因此几种方法结合使用将更有利于水曲柳体细胞胚的同步化调控。同时

3、，研究中还发现，前期诱导培养时间过长不利于水曲柳体细胞胚的同步化控制，综合各种处理方法后我们认为前期诱导培养15d时最有利于水曲柳体细胞胚的同步化。在体胚苗萌发培养中，冷冻处理不利于水曲柳体细胞胚生根和后期生长，而将体细胞胚快速干燥10min后转移到萌发培养基中可明显促进水曲柳成熟胚的萌发、生根和后期生长。关键词水曲柳僻mandshuricaRupr．)：体细胞胚；子叶形胚；同步化AbstractItwaspreconditionforusingplantsomaticembryosthathadasomaticembryogenesissystemofhighfrequencyandsyn

4、chronization，whichwasintegrantforcontroltheprocessautomallyandstudythephysiologicalandbiochemistryandbiomoleculequestions．Inthispaper’weusedimmaturezygoticembryotostudythesynchronizationofManchfianashsomaticembryogenesis．Itwasobservedthattheeffectofosmoticstress，lowtemperatureandABAinsynchronizatio

5、nofsomaticembryogenesis，andtheeffectofdesiccationandchillingingermination，regerationandgrowthlater．Thiswasthefirststudyinsynchronizationofsomaticembryogenesis，whichprovidedabaseforManchrianashsomaticembryogenesisandforperfectsystemofManchrianashsomaticcmbryogenesis．Themainresultswereasfollow：Choose

6、byhands，siftout，hungerandliquidinlaterculturewerenotfitforsynchronizationofManchfianashsomaticembryogenesis．Osmoticstress，lowtemperatureandABAwerepromotethesynchronizationofsomaticembryogenesis．T1lefrequenceofsynchronizationofcotyledonarystagebychangedosmoticstresswasthehighest．ButthereWaSobviousph

7、enomenonofdegenerate．TheoptimalmethodWasinducted15dwith50g‘L．1SUCrose；thefrequencyofsynchronizationofsomaticembryowas81．0％．nefrequenceofsynchronizationofcotyledonarystagebychangedABAWashJigherandnoobviousph