生淀粉酶细菌菌株的筛选及其酶学性质研究

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1、粮油食品粮油食品科技第20卷2012年第5期生淀粉酶细菌菌株的筛选及其酶学性质研究谭海刚，李静(青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛266109)摘要:分离筛选到一株生淀粉酶酶活较高的菌株QD006，通过形态和常规生理生化鉴定，初步确定该菌为Staphylococcusintermedius。该菌产生的生淀粉酶最适温度为50℃，最适pH为6．5，该酶++2+3+2+2+具有良好的热稳定性。Na、K、Ca对该酶有激活作用，Fe、Zn和Cu对该酶有抑制作用。关键词:生淀粉糖化酶;细菌;酶学性质中图分类号:TS201．3文献标

2、识码:A文章编号:1007－7561(2012)05－0056－03StudyonisolationofbacterialstrainsofrawstarchglucoamylaseanditsenzymaticpropertiesTANHai－gang，LIJing(CollegeofFoodScience＆Engineering，QingdaoAgriculturalUniversity，QingdaoShandong266109)Abstract:AstrainQD006withhigheractivityofraw－

3、starchglucoamylasewasisolatedandprimitivei-dentifiedasStaphylococcusintermediubymorphologyandconventionalbiochemicalidentification．Theenzymaticpropertyrevealedthatoptimumtemperaturewasat50℃andpH6．5．Theenzymehadgood++2+3+2+thermalstability．Theenzymeactivitywasactiva

4、tedbyNa，KandCaandrestrainedbyFe，Zn2+andCu．Keywords:rawstarchglucoamylase;bacteria;enzymaticproperty生淀粉糖化酶一般指可以直接作用、水解或糖1．2培养基化未经蒸煮的淀粉颗粒的酶，可能包括α－淀粉酶、平板分离培养基:可溶性淀粉3g、蛋白胨10g、［1－2］β－淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、普鲁蓝酶等酶。它NaCl5g、琼脂20g、蒸馏水1000mL，pH7．2～7．4，可以将淀粉传统工艺中的糊化、液化和糖化合并为121℃灭菌20min。其

5、中可溶性淀粉在105℃下干一步直接进行糖化，如果将其应用于无蒸煮的酒精热灭菌2h，然后在65℃下无菌操作加入。［3－4］发酵，可节约总能耗的30%～40%。已发现的液体发酵培养基:可溶性淀粉3g、蛋白胨10g、能产生淀粉酶的微生物种类较多，报道最多的是黑NaCl5g、蒸馏水1000mL，pH7．2～7．4，121℃灭菌［5－6］曲霉、根霉和芽孢杆菌。本文筛选出能产生淀20min。其中可溶性淀粉在105℃下干热灭菌2h，粉酶的细菌，对其进行初步鉴定并进行了酶学性质然后在常温下无菌操作加入。的研究。1．3菌种筛选方法1材料与方法

6、初筛:变色圈法，选择圈径比较大的菌落，进一1．1土样校内食堂垃圾附近的土壤。步划线分离后，进行产酶测定。复筛:测酶活，选择酶活高的菌株作为目的菌株。1．4生淀粉酶活的测定方法收稿日期:2012－03－20作者简介:谭海刚，男，1979年出生，山东临朐人，讲师．酶活力测定方法:将发酵液在4℃，8000r/min瑓瑦粮油食品科技第20卷2012年第5期粮油食品下离心30min后取上清液，再通过抽滤得到的滤液QD006和QD007做斜面保藏并通过摇瓶复筛，得到为粗酶液，取1mL粗酶液，加入到19mLpH6．5的QD006酶活力最

7、高，达到10．18U/mL，确定为目标柠檬酸盐缓冲液中，再加入0．5g的可溶性淀粉为菌株。底物，30℃水解2h后用0．5mL4%的NaOH溶液表1生淀粉糖化酶菌种筛选结果终止反应。反应液在4000r/min下离心5min，用菌种编号圈径比菌种编号圈径比DNS法测定上清液中还原糖量，测定540nm处的吸QD0015．1QD0054．7光度(在酶活测定体系中，以纯水取代粗酶液作为QD0023．2QD0065．8空白)，查葡萄糖标准曲线得到水解产物中葡萄糖QD0033．6QD0075．2的量，从而确定生淀粉糖化酶的酶活力大小。QD

8、0043．9QD0083．5酶活力定义:在pH6．5、温度为30℃保温1202．2菌种鉴定min条件下，1min产生1μg葡萄糖所需要的酶的QD006的菌落较小，较薄，较透明且“细腻”，边量规定为1个酶活力单位(U)。缘光滑，革兰氏染色确定该菌为革兰氏阳性菌;经显1．5菌种鉴定微观察呈球形