苹果乙烯信号转导相关基因MdEIL1的克隆及功能鉴定

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1、园艺学报，2016，43(3)：409–418.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0830；http：//www.ahs.ac.cn409苹果乙烯信号转导相关基因MdEIL1的克隆及功能鉴定**苏玲，王淑惠，郝玉金，王小非，由春香（山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，农业部黄淮地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，山东泰安271018）摘要：以苹果‘嘎拉’（Malus×domestic‘RoyalGa

2、la’）为试材，分离了乙烯信号转导相关的MdEIL1基因（基因序列号：MDP0000423881）。序列分析表明，该基因包含长为1980bp完整的开放阅读框，编码658个氨基酸的蛋白。进化树分析表明MdEIL1属于EIN3/EIL转录因子家族蛋白。定量分析显示，MdEIL1基因在苹果的根、茎、叶、花和果实中有不同程度的表达，而且它的表达也受到乙烯、生长素和细胞分裂素的诱导。通过原核表达试验体外诱导MdEIL1蛋白成功，为后续蛋白功能鉴定奠定了基础。MdEIL1基因在拟南芥中异位表达，增强其乙烯响应，在暗处

3、表现为下胚轴变短，并且AtERF1的表达量上升，显示转基因植株对乙烯的敏感性提高。关键词：苹果；MdEIL1；表达分析；原核表达；功能鉴定中图分类号：S661.1文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）03-0409-10MolecularCloningandFunctionalCharacterizationoftheEthyleneSignalingRelatedGeneMdEIL1inApple**SULing，WANGShu-hui，HAOYu-jin，WANGXiao-fei，an

4、dYOUChun-xiang（CollegeofHorticultureScienceandEngineering，ShandongAgriculturalUniversity，StateKeyLaboratoryofCropBiology，MOAKeyLaboratoryofHorticulturalCropBiology（HuanghuaiRegion）andGermplasmInnovation，Tai’an，Shandong271018，China）Abstract：Anethylenesigna

5、lrelativetranscriptionfactornamedMdEIL1wasclonedfromMalus×domestic‘RoyalGala’.SequenceanalysisshowedthatMdEIL1contained1980nucleotides，whichencodedaproteincontaining658aminoacids.PhylogenetictreeanalysisshowedthatMdEIL1belongedtoEIN3/EILtranscriptionfacto

6、rfamilyproteins.qRT-PCRsanalysisindicatedthatMdEIL1hasdifferentlevelsofexpressioninapple’sroots，stems，leaves，flowersandfruits，andwasinducedbyethylene，auxinandcytokininhormoneshormonesinplants.WeobtainedtherecombinantMdEIL1proteinbyProkaryoticexpression，wh

7、ichwasessentialforproteinfunctionalidentificationinvitro.EctopicexpressionofMdEIL1inArabidopsiscanpartiallyenhanceethyleneresponse，whichexhibitedtheshorthypocotylindarknessandexpressionofAtERF1wasimprovedintheMdEIL1overexpressingtransgeniclines.Keywords：a

8、pple；MdEIL1；expressionanalysis；prokaryoticexpression；functionalidentification收稿日期：2016–01–12；修回日期：2016–03–04基金项目：国家重点基础研究发展计划（‘973’）项目（2013CB945103）；国家自然科学基金项目（31272142，31471854）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：x