转基因柑橘外源基因拷贝数的实时荧光定量PCR检测

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1、园艺学报，2016，43(6)：1186–1194.ActaHorticulturaeSinica1186doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0081；http：//www.ahs.ac.cn转基因柑橘外源基因拷贝数的实时荧光定量PCR检测*许兰珍，何永睿，雷天刚，彭爱红，姚利晓，姜国金，李强，邹修平，*陈善春（西南大学/中国农业科学院柑桔研究所，国家柑桔工程技术研究中心，国家柑桔品种改良中心，重庆400712）摘要：为分析转基因柑橘中外源基因整合拷贝数，基于实时荧光定量PCR法，建立通用、准确、简便的转基因柑橘外源基因拷贝数检测体系，利

2、用该体系成功检测了150个转基因柑橘单株系外源基因整合拷贝数。结果表明，转基因柑橘中外源基因整合最低拷贝数为1，最高达5个，其中1、2和≥3拷贝的单株数分别占总数的40.0%、18.0%和42.0%；采用Southernblot技术进行检测，结果基本一致，极少数单株经实时荧光定量PCR分析的拷贝数比Southernblot检测的数值高。说明本研究建立的实时荧光定量PCR方法检测转基因柑橘外源基因整合拷贝数更加准确可靠。拷贝数为1~2的转基因株系可作为将来开展转基因目标性状研究及转基因生物安全性评价有利用价值的试验材料。关键词：柑橘；实时荧光定量PCR；转基因；拷贝数；So

3、uthernblot中图分类号：S666文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）06-1186-09IdentificationoftheCopyNumberofExogenousGeneinTransgenicCitrusbyQuantitativeReal-timePCRXULan-zhen，HEYong-rui，LEITian-gang，PENGAi-hong，YAOLi-xiao，JIANGGuo-jin，LIQiang，**ZOUXiu-ping，andCHENShan-chun（CitrusResearchInstitute，SouthwestU

4、niversity/ChineseAcademyofAgriculturalSciences；NationalCitrusEngineeringResearchCenter；NationalCenterforCitrusVarietiesImprovement，Chongqing400712，China）Abstract：Thecopynumberofexogenousgeneisanimportantfactorinfluencingtheexpressionandgeneticstabilityofthetargetgene.Currently，transgeneco

5、pynumbersbySouthernblot，whichislaboriousandtime-consuming，requiresrelativelylargeamountsofplantmaterialsandmoreexperimentaltechnology.Here，basedonquantitativereal-timePCR（qRT-PCR）technology，aprotocolforestimatingtransgenecopynumberinGMcitruswasconstructed.Theresultsshowedthatthelowcopynum

6、berofexogenousgeneintransgeniclinewasone，andthehighestcopynumberwasfive.One，twoand≥threecopiesdetectedaccountedfor40.0%，18.0%，42.0%，respectively，ofthetotal.TheexogenousgenecopyinthetransgeniclineswasfurtherconfirmedbySouthernblot，andthecopynumberwasconsistent收稿日期：2016–03–25；修回日期：2016–06–0

7、3基金项目：国家自然科学基金项目（31272150）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-27）；国家科技支撑计划项目（2012BAD19B06）；重庆市基础与前沿研究计划项目（cstc2015jcyjA80042）；中央高校基本科研业务费专项（XDJK2014C129）；中央高校基本科研业务费专项（XDJK2014A018）；重庆市集成示范重点项目（cstc2015jcsf-kjfp80027）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：zouxiuping@cric.cn；scc