Cripto1蛋白的表达及多克隆抗体的制备

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1、摘要肿瘤是目前人类的多发病，其死亡率仅次于心血管疾病。肿瘤的发生与细胞内原癌基因有密切的关系，肿瘤的形成多伴随着原癌基因表达产物的增多。Cript0．1，也称为畸胎瘤衍化生长因子(teratocarcinoma-derivedgrowch矗lctor-1，TDGF一1)，发现于1987年，是从未分化的人畸胎瘤细胞NTE黜墟细胞系cDNA文库中钓取并鉴定的基因。Cripto．1蛋白内部具有标志性EGF．CFC功能结构域，可与细胞表面多种受体结合行使功能。Cripto．1可作为辅助因子参与TGF．p家族成员的多个细胞信号通路

2、的传递过程，还参与活化多条控制细胞增殖与凋亡能力的信号通路。Cripto．1的生物学作用有很多，包括胚胎发育中原肠胚的形成，哺乳动物乳腺发育和乳蛋白表达，血管发生等。Cript0．1与肿瘤有极高的相关性，在多种癌细胞和组织中有异常高的表达水平，而在正常的细胞系中则表达量很低或不表达。Cripto．1在肿瘤细胞的形成、恶变及转移过程中起作用、是公认的原癌基因。本研究首先将Cript0．1的功能区，即EGF．CFC结构域基因克隆入原核表达载体，进而对目的蛋白进行原核表达，在对表达条件进行优化后对表达产物进行了分离、纯化和复性

3、。并进～步用纯化的蛋白免疫新西兰兔获得兔源多克隆抗体。之后应用此多克隆抗体对多种人源的肿瘤细胞及正常细胞系中Cripto．1的表达进行了检测。本研究为进一步探讨Cripto．1的生物学功能及以Cript0．1为靶点的肿瘤诊断试剂的研发奠定了物质基础。关键词：C嘶}t0．1；原癌基因；蛋白表达；抗体制备AbstractThmorisatypeofcoI彻10ndiseaseinhumallbeingwhosedeathrate1snexttocardiopamy．OncogeneplaysaIlimpo切ntpartint

4、umorigenesis，aIldexpressesataMghleVelinsome虹ndsoftumorcells．Cripto一1，aslocalledteratocarcinonla—deriVedgro叭hf．actor-1，wllichwaSdiscoVeredin1987andwaScloned舶mahumanNTERA2／D1embryonalcarcinomacDNA1ibrary．Cripto一1hasEGF—CFCmotifasmnctionaldomain，w11ichisakirldofmemb

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6、ripto-1．Cript0-1isamulti劬ctionalgenewithmany‰esi11cludiIlggaStrulationaIldgem1ayerfo珊ation，mammaD，酉anddeVelopmentandmi墩proteiIlexpressionaSwell嬲a11百ogenesis．Cripto-lexpressesatalli曲1eVeliIlv撕e够oftumortissuesbutata10wleVeliIlfo订11a1tissues．Cripto-1promotestumo唱ene

7、sis，mali印ancyandmetaStasis，w11ichisdeemedausakiIldofoncogene．hltmsstudy，、明clonedtlleEGF-CFCdomainofCripto一1i11t0prokauryoticexpressionplaSmid，拟ldexpressedtheproteiIliIltlleE．c01iBL21irldlJcedby口TG，arlda缸erpurificationandremmHation，theproteinw硒usedt0preparepolyclo

8、nalantibody．Thenweuset11eantibodyt0detectmeexpressionofCript0一linbothhlⅡlalltumorandnonnalceU1iIles．Thjsstudyestablishedabasesfor矗lrtherinvesti星rationoftllebio