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1、一株产低温右旋糖苷酶海洋细菌的筛选和鉴定1,21,21,21,21,2311吕明生,王淑军,房耀维,焦豫良,刘姝,葛亮,吴彬彬,李佳(1.淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005;2．江苏省海洋资源开发研究院,江苏连云港222001;3.上海海洋大学食品学院,上海201306)摘要:从连云港海域筛选得到一株产低温右旋糖苷酶的菌株LP621,经形态特征、生理生化特征以及16SrDNA序列分析和鉴定,该菌株为Pseudoalteromonastetraodonis。该菌产生低温右旋糖苷酶的最适作用温度为30℃,在80℃保温2.5h后该酶仍具有40%以上的活性。目前尚无Pseudoalter
2、omonastetraodonis产生低温右旋糖苷酶的报道。菌株LP621产生的右旋糖苷酶作用温度低,耐热性好,有较大的潜在工业应用价值。关键词:低温右旋糖苷酶;交替假单胞菌(Pseudoalteromonastetraodonis);筛选;鉴定中图分类号:Q93-3文献标识码:A文章编号:1000-3096(2011)05-0032-06右旋糖苷(Dextean)主要是α-1,6-糖苷键连接的温蛋白酶的新来源。目前国内外对海洋微生物产右旋葡萄糖。右旋糖苷酶(Dextranase,α-D-1,6-Glucan-糖苷酶的研究尚未见报道。6-D-Glucanohydrolase,EC3.2.
3、1.11),又叫α-葡聚糖酶,在本研究中,作者从连云港海域贝类中筛选到[1]是专一切割右旋糖苷中α-1,6糖苷键的水解酶。右一株产生低温右旋糖苷酶的海洋细菌,初步研究表旋糖苷酶有很重要的应用价值,右旋糖苷酶在制糖明酶的最适作用温度为30℃;对该菌株的生理生化工业中降解多糖聚合物,降低多糖的相对分子质量,特征和分子鉴定进行了研究,鉴定为交替假单胞菌[2](Pseudoalteromonastetraodonis)LP621。本研究为海从而降低糖的黏性。而在口腔疾病研究的领域中,右旋糖苷酶能有效阻滞唾液糖蛋白和黏性葡聚糖所洋细菌低温右旋糖苷酶的进一步研究和开发奠定了组成的口腔牙菌斑形成,对龋
4、齿和牙周病的防治具基础。[3]有重要的意义。在血液替代品制造中该酶被用于控制[4]1材料和方法右旋糖苷的水解;并且可以增强抗菌药物的疗效。目前国内外报道的产生右旋糖苷酶微生物主要1.1样品采集[5-9]为青霉(Penicilliumsp.)、斯达油脂酵母(Lipomyces连云港海州湾海域、港口及远洋捕捞船采集各[10-11][12]starkeyi)、对角毛壳菌(Chaetomiumgracile)、类海鱼、贝类、海水和海泥。[13][1]曲霉(Aspergillusustus)、芽孢杆菌(Bacillussp.)、[14-17]1.2培养基链球菌(Streptococcussp.)均
5、能产生右旋糖苷酶。根据Margsin等1991年的定义,通常把最适催化2216E培养基:蛋白胨0.5%,酵母粉0.1%,陈温度在30℃左右,在0℃左右仍有一定催化效率的酶海水配制,pH8.0。初筛培养基:蛋白胨1%,牛肉膏称为低温酶。低温酶具有最适温度低,低温下催化活性0.5%,右旋糖苷0.2%,琼脂2%,陈海水配制,pH高,高温下容易失活等性质,在工业生产中可以节约8.0。复筛培养基:蛋白胨1%,牛肉膏0.5%,右旋糖能源及减少中温菌的污染,这些催化性质使低温酶在苷0.2%,陈海水配制,pH8.0。产酶培养基:酵母粉[18]工业生产应用中具有很大的优势。目前右旋糖苷酶主要分离于人的口腔
6、、陆地及温泉的微生物,大部分酶收稿日期:2010-11-05;修回日期:2011-01-22为中温酶,最适温度大多为50℃。低温酶主要来源于基金项目:国家863计划项目(2011AA09070302);江苏省海洋生物技低温生态环境如海水、海底沉积物、冰川、高山、南术重点建设实验室开放课题项目(2008HS008);连云港市自然科学基金项目(ZH200801)北极的低温微生物产生,随着陆地资源的不断开发而作者简介:吕明生(1963-),男,安徽旌德人,副教授,从事海洋生物面临枯竭,近年来人们逐渐将海洋微生物作为获得低技术研究,电话:0518-85895421,E-mail:mingshen
7、glu@hotmail.com32海洋科学/2011年/第35卷/第5期0.1%,蛋白胨0.1%,右旋糖苷1%,陈海水配制,pH长序列PCR扩增参照文献[22]进行。正向引物P1:8.0。微量盐溶液(g/L):VOSO4·2H2O0.005,LiCl0.05,5′-GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,反向引物P2:H3BO30.1,NiCl2·6H2O0.01,BaCl2·2H2O0.005,5′-CGGCTACCTT
