大鼠原代膀胱上皮细胞培养试剂盒

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1、大鼠原代膀胱上皮细胞培养试剂盒产品简介本试剂盒主要用于大鼠原代膀胱上皮细胞的培养，包含大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基（Cat.No.IMT-CBM-3004）和F细胞（Cat.No.IMT-2001-1）两个组份。大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基是即用型培养基，包含大鼠原代膀胱上皮细胞生长所需的多种生长因子，以及必需的氨基酸、维生素、糖类、无机离子、微量元素等成分。在IMMORTECH技术人员的标准操作流程下，该细胞可持续传50代，仍能保持良好的细胞活性和原代细胞分化状态。产品货号IMT-K1-3004产

2、品品牌IMMORTECH产品规格100mL大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基+10管F细胞产品用途本产品只适用于实验研究，不适用于诊断和治疗。运输条件干冰运输储存条件大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基（2-8℃避光）;F细胞（液氮）使用方法本方法以T25cm²透气细胞培养瓶为例说明，如为其它规格的细胞培养器皿，请相应的增加或减少细胞培养基、胰酶等用量。大鼠原代膀胱上皮细胞的初次分离：（1）复苏冻存的F细胞，37℃水浴旋转速溶，转移入含有9mLPBS缓冲液（不含钙镁离子）的15mL离心管中，低速离心（1000rp

3、m，室温）4min。（2）吸弃上清液，将F细胞重悬于1-2mL大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基中形成单细胞悬液。（3）转移到T25中，将培养基体积补至4-5mL，轻轻晃动细胞培养瓶，使F细胞均匀铺在培养瓶中，置于培养箱（37℃，5%CO2）贴壁5小时以上或过夜，确保F细胞贴壁量达70%T25细胞培养瓶以上。(★若F细胞贴壁量不足70%T25cm²细胞培养瓶，需按缺少的量补加新复苏的F细胞，使F细胞贴壁量达70%T25cm²细胞培养瓶以上，再进行后续实验操作。)（4）若有漂浮的F细胞，则更换新鲜大鼠原代膀胱

4、上皮细胞基础培养基；若没有漂浮的F细胞，则无需更换。（5）将新分离的大鼠原代膀胱上皮细胞重悬于1-2mL大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基中，转移至已接种F细胞的培养瓶，培养基体积补至7mL，置于培养箱（37℃，5%CO2）培养。（6）24h后观察，若有漂浮细胞，需更换新鲜大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基。更换时，动作轻柔，防止F细胞脱落飘起。深圳市永生原代细胞生物科技有限公司企业QQ：3169429558深圳市南山区高新北六道兰光科技园A612电话：0755-26406001；0755-26924629销售

5、邮箱：sales@immortech.com.cn大鼠原代膀胱上皮细胞的换液：建议每隔2-3天更换新的大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基。首先吸弃旧的培养基，用4mLPBS缓冲液轻轻润洗1-2次，然后加入7mL新鲜的大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基。F细胞的更换：建议每隔2-4天更换F细胞。（1）小心吸去培养基，4mLPBS缓冲液润洗2次，加入0.6mL0.02%EDTA（PH7.2-7.4，细胞培养专用，不含钙镁离子，使用前37℃水浴复温）。轻轻晃动细胞培养瓶，使EDTA铺满整个细胞层后，轻轻拍打细胞培养瓶

6、使F细胞脱落，同时谨防大鼠原代膀胱上皮细胞脱落。（2）去除脱落的F细胞后，用4mLPBS缓冲液轻轻润洗3次，加入5-6mL大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基。（3）复苏新的F细胞，加入培养瓶继续共培养。(★若大鼠原代膀胱上皮细胞克隆较多，可适当减少F细胞的用量。)（4）5h或过夜后观察F细胞的贴壁情况，若有漂浮的F细胞，先更换新鲜大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基；再看整体细胞的融合度，若不足80%，需补加新的F细胞。大鼠原代膀胱上皮细胞的消化传代：若大鼠原代膀胱上皮细胞融合度达80%，或者融合度不足80%但个

7、别大克隆发生挤出现象或老化趋势，则需消化传代。（1）吸去培养基，4mLPBS缓冲液润洗2次，加入0.6mL0.02%EDTA（PH7.2-7.4，细胞培养专用，不含钙镁离子，使用前37℃水浴复温），轻轻晃动细胞培养瓶，使EDTA铺满整个细胞层后，轻轻拍打细胞培养瓶使F细胞脱落，同时谨防大鼠原代膀胱上皮细胞脱落。（2）去除脱落的F细胞后，用4mLPBS缓冲液轻轻润洗2次。（3）加入0.6mL0.05%胰酶-EDTA（PH7.2-7.4，细胞培养专用，不含钙镁离子，使用前37℃水浴复温）。轻轻晃动细胞培养瓶

8、，使消化液铺满整个细胞层后，置于37℃孵育2-7min（视细胞贴壁能力而定）。当90%大鼠原代膀胱上皮细胞从培养瓶脱落后，加入1mL终止液（含10%血清的PBS缓冲液，使用前37℃水浴复温）终止。（4）收集细胞悬液全部转移至15mL离心管中，加入4mLPBS缓冲液清洗培养瓶2次，将所有液体转移至同一15mL离心管，低速离心（1000rpm，室温）4min。（5）吸弃上清液，用1-2mL大鼠原代膀胱上皮细胞基础培养基重悬大鼠原代膀胱上皮细胞并