胆管结扎大鼠肠道菌群结构的分子生态学研究

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1、上海交通大学硕士学位论文胆管结扎大鼠肠道菌群结构的分子生态学研究姓名：赵琴丽申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：赵立平20070101上海交通大学2007届硕士学位论文化。PCA载荷值则找出了造成两组差异的主要条带。割胶测序，并与RibosomalDatabaseProjectⅡ(RDPⅡ,release9.40)比对找出序列最相似的菌，它们分别是Bacteroidessp.CJ89（96.2%），Staphylococcusnepalensis（100%），嗜酸乳杆菌（99.5%）。前两者在胆管结扎组显著减弱而后者正好相反。针对乳酸菌、梭菌、双歧杆菌、拟杆菌的类群特异性P

2、CR-DGGE及PCA表明胆管结扎使得模型组大鼠的4类菌群结构组成也发生了不同于假手术组的变化。乳酸菌DGGE的PCA载荷值分析发现Lactobacillussp.L-YJ（99.4）和小鼠乳杆菌（99.1%）在胆管结扎组丰富度减少，而嗜酸乳杆菌（99.4%）的数量却上升（与V3-DGGE的结果一致）。对梭菌DGGE图谱进行PCA分析发现造成手术后胆管结扎组和假手术组分开的最主要原因是代表布氏瘤胃球菌（100%）的条带在模型组显著增强。针对双歧杆菌的DGGE图谱及其PCA表明手术后对照组和模型组大鼠肠道菌群的结构组成明显不同，主要表现在假长双歧杆菌（99.8%）的数量在模型组显著增加，而动物

3、双歧杆菌（99.8%）却明显减少。Shannon-Weaver指数说明对照组大鼠肠道双歧杆菌组成多样性较之假手术之前显著增加（P<0.05），而模型组变化不大（P>0.05）。拟杆菌的DGGE和PCA显示假手术后大鼠肠道拟杆菌组成的变化较胆管结扎组大，是因为有两条邻近的明亮条带出现在假手术组，而没有出现在胆管结扎组。本研究用免培养的分子方法系统分析了胆管结扎大鼠在发病前后肠II上海交通大学2007届硕士学位论文道菌群的变化情况，并与假手术组比较，找到了梗阻性黄疸疾病相关的重要菌如嗜酸乳杆菌、布氏瘤胃球菌、假长双歧杆菌，从而为临床诊断和治疗提供了有价值的参考依据。关键词:胆管结扎，肠道菌群，E

4、RIC-PCR，DGGE，PCAIII上海交通大学2007届硕士学位论文STRUCTURALSHIFTSINGUTMICROBIOTAOFRATSINRESPONSETOBILEDUCTLIGATIONABSTRACTObstructivejaundice（OJ）isaclinicalsymptomofmulti-systematicmalfunctionduetobiliaryobstructionwhichiscausedbymechanicalfactorsonintra-andextrahepaticbileduct.OJanditscomplicationsarehighlyass

5、ociatedwithintestinalmicrobiota.Thebileductligation(BDL)ofSDratsisthemostcommonmodelforexperimentalstudyofobstructivejuandice.WefocusedontheanalysisofgutmicroflorainBDLrats.ThestructuralshiftsofbacterialcommunityingutoftheBDLgroupandshamoperated(SO)groupwerecompared.Thefecalsampleswerecollectedfrom

6、bothgroupsat3daysbeforeand3,7,14daysafteroperation,respectively.ThetotalfecalmicrobialDNAwasextracted.Formolecularanalysisoftheintestinalbacterialcommunity,ERIC-PCR,16SrRNAgeneV3region-DGGEandgroup-specificDGGE(forfourgroups-Lactobacillusspp.,Clostridiumleptumsubgroup,BifidobacteriaandBacteroidessp

7、p.,respectively)wereusedandtheprincipalcomponentanalysis(PCA)wasapplied.TheERIC-PCRelectrophoresisshowedthattherewereindividualIV上海交通大学2007届硕士学位论文variationofthegutmicrobiotainSDrats.Thediversityofintestinal